成体大鼠胰腺干细胞的获取、定向分化及体内移植实验
成果信息
项目年度编号: 1400191482
限制使用: 国内
省市: 山东
中图分类号: R587.105
成果类别: 基础研究
成果公布年份: 2013
关键词: 糖尿病治疗 胰腺干细胞 动物实验
成果简介: 该课题属于卫生、社会保障和社会福利业领域。内容包括胰腺干细胞分离、干细胞培养、细胞免疫组化鉴定细胞基因特性、诱导干细胞分化、葡萄糖浓度在诱导分化过程中的作用、建立糖尿病大鼠模型、移植实验等方面内容。该实验采用成体大鼠胆总管穿刺,原位灌注ⅴ-型胶原酶消化胰腺的方法,充分消化后获取的胰腺各细胞混杂在一起,运用Ficoll400浓度梯度离心法对细胞进行分离,获取高浓度胰腺导管干细胞。根据干细胞贴壁生长的特点,通过换液将悬浮生长的混杂细胞去除掉。原代培养的胰腺干细胞用0.25%胰酶、EDTA消化,按1:2传代,以后按1:3~1:4传代培养。对传代后的细胞进行SABC-FITC免疫荧光染色。鉴定细胞表面CK19、Pdx-1和Nestin基因,并设置Insulin及Glucagon染色阴性对照,确定干细胞特性。利用Bonner-WeirS等的诱导方案,诱导胰腺干细胞向胰岛细胞定向分化,并利用双硫腙(DTZ)对胰岛细胞特异性染色表现为棕红色的特点,进行分化后胰岛细胞鉴定。高糖条件下刺激诱导后细胞,监测胰岛素分泌特性,并采用ELISA染色光电酶标记电脑读值测定胰岛素释放量,摸索出胰岛素释放最大量下的最佳葡萄糖浓度。利用链脲佐菌素(STZ)的胰腺毒性作用建立糖尿病大鼠模型,将糖尿病大鼠进行分组设计,实验组采用胰岛细胞腹腔移植,在移植后的1周、2周、3周、4周时间段测量血清胰岛素和血糖水平,评价实验组方法对糖尿病的治疗作用。该实验获取了高纯度的胰腺干细胞,并成功诱导分化为有胰岛素分泌功能的胰岛细胞,摸索出胰岛素释放最大量下的最佳葡萄糖浓度,并证明胰腺干细胞来源胰岛细胞短期内对糖尿病具有治疗作用。课题的研究有助于人类开展胰腺干细胞途径进行糖尿病治疗,解决临床胰岛细胞来源不足的难题。实施外源胰岛细胞对机体血糖的监控,调节血糖水平,使更多的病人摆脱外源胰岛素依赖,解除病人痛苦,不但具有广阔的市场前景,同时能为医院带来可观的经济和社会效益。该研究经省内外专家评审鉴定,一致认为达到国内领先水平。已在青岛大学医学院附属医院及青岛市第八人民医院进行推广应用,取得显著社会效益。
申报信息
相关人信息
完成单位: 青岛市市立医院
完成人: 史光军 张萍 许评 张磊 董汉光
行业及专利信息
应用行业名称: 医学研究与试验发展
应用行业码: 754
转让信息
投资信息
推广信息
联系信息
联系单位名称: 青岛市市立医院
联系单位地址: 山东省青岛市胶州路1号
邮政编码: 266011