电融合化学激活前培养时间对绵羊重构胚发育的影响
Effects of Culturing Time before Electrical Fusion and Chemical Activation on Constructed Sheep Embryos
摘要 采用绵羊(Bos gagrus)体细胞带下注入体外成熟的卵母细胞构建重构胚,比较了不同的融合和化学激活前培养时间对重构胚融合和发育的影响.融合前培养1h,比较不同的激活前培养时间,发现各组重构胚卵裂率、桑棋胚率和囊胚率均无显著差异(P>0.05),但激活前培养2h胚胎完整率(95.81%)高于对照(74.64%),差异显著(P<0.05);激活前培养2h,比较不同的融合前培养时间,发现两组融合率,激活胚胎完整率和囊胚率无显著差异(P>0.05),但融合前培养lh的卵裂率(76.88%)和桑椹胚率(40.63%)显著高于直接融合(64.48%和21.50%)(P<0.05).利用G1和G2培养早期克隆胚胎,将发育至桑椹胚囊胚的胚胎移植到41只受体绵羊,仅1只妊娠但于第104天流产.用5对绵羊微卫星DNA多态性引物对该克隆流产胎儿皮肤成纤维细胞、供体细胞、受体绵羊及一只普通对照母绵羊皮肤成纤维细胞进行微卫星DNA分析,结果表明5对微卫星DNA引物扩增各组细胞DNA,扩增产物经过10%琼脂糖凝胶电泳和银染后,条带均有明显的多态性.条带分析显示,克隆流产胎儿的微卫星DNA指纹与供体细胞完全相同,而不同于其受体母亲和对照绵羊.证明该流产羔羊基因来源于供体细胞,为体细胞克隆绵羊.
Author: TAN Xiao-ying JIA Wen-wen GAO Zhi-min YANG Chun-rong MA Xiao-ling DOU Zhong-ying
作者单位: 西北农林科技大学动物医学院,陕西省干细胞工程技术研究中心,杨凌,712100
刊 名 农业生物技术学报 ISTICPKU
年,卷(期): 2009, 17(2)
分类号: S188
机标分类号: S81 TQ4
在线出版日期: 2009年5月25日
基金项目: 国家自然科学基金,陕西省科技重点项目