牛Oct4基因克隆及其逆转录病毒表达载体的构建
Cloning of Bovine Oct4 Gene and Construction of Retroviral Expression Vector
摘要 为了克隆奶牛Oct4基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生逆转录病毒质粒pMSCV-Oct4的包装细胞株.我们以50~60日龄的胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR的方法扩增出牛Oct4基因全序列,全长为1 083 bp与GenBank公布的序列的同源性为99.4%.将其插入到逆转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,获得重组逆转录病毒质粒pMSCVneo-Oct4.鉴定正确后,通过Lipofectamine2000将其转导入包装细胞PT67,用含有G418的培养液进行抗性筛选,获得阳性细胞克隆.细胞上清经过RT-PCR、透射电镜及病毒滴度测定等方法鉴定,证实所包装病毒存在,其滴度值为8.83×107 cfu/mL.试验结果表明我们已获得携带牛Oct4基因的高滴度感染性逆转录病毒.
Author: Chen Dongmei Lv Changrong Xin Xiaoling Dou Zhongying
作者单位: 西北农林科技大学动物医学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心,杨凌,712100 西北农林科技大学动物医学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心,杨凌,712100;河南省农业科学院畜牧兽医研究所,郑州,450002
刊 名 农业生物技术学报 ISTICPKU
年,卷(期): 2010, 18(3)
分类号: S8
机标分类号: R73 R39
在线出版日期: 2010年8月31日
基金项目: 国家高技术研究与发展计划(863)项目,教育部重大项目