稳定表达Wnt3a基因的猪胰腺干细胞株的建立
Establishment of Pocine Pancreatic Stem Cells Strain Stably Expressing Wnt3a
摘要 Wnt3a是经典Wnt通路上游的一个重要分泌蛋白,Wnt3a蛋白的活化可促进多种细胞的增殖和分裂.为了揭示Wnt3a在猪胰腺干细胞(PSC)增殖及分化中的调控机理,采用RT-PCR从pGKS2P(+)-Wnt3a质粒中扩增出Wnt3a全长片段,将测序正确的Wnt3a连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP1)报告基因的真核表达载体pIRES2-AcGFP1中,构建重组质粒.经EcoR I/BamH I酶切鉴定后,用脂质体转染至猪PSC.用抗生素G418筛选3周后获得稳转pIRES2-AcGFP 1-Wnt3a的细胞株.荧光显微镜下观察到几乎所有细胞表达绿色荧光蛋白.RT-PCR和Western blot的结果显示,稳转Wnt3a组的猪PSC中Wnt3a mRNA及蛋白表达水平比对照组明显升高.这些结果表明,稳定表达Wnt3a的猪胰腺干细胞株成功建立,为进一步研究Wnt3a在猪PSC增殖及分化中的作用机理提供了基础资料.
作者: 彭莎 张军林
Author: PENG Sha ZHANG Jun-Lin
作者单位: 西北农林科技大学动物医学院,杨凌712100;陕西省干细胞工程技术研究中心,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100
刊 名 农业生物技术学报 ISTICPKU
年,卷(期): 2012, 20(11)
机标分类号: S85 R65
在线出版日期: 2013年1月21日
基金项目: 国家自然科学基金项目,高等学校博士学科点专项科研基金