山羊角膜缘干细胞荧光蛋白(Venus)细胞株的建立及角膜上皮植片构建
Establishment of goat limbal stem cell strain expressing Venus fluorescent protein and construction of limbal epithelial sheets
摘要 角膜缘干细胞是角膜上皮更新与修复的来源,角膜上皮受损严重常会导致角膜盲.尽管近几年通过角膜缘千细胞移植术(LSCT)治愈角膜上皮受损的临床应用已被推广,但是对于角膜缘干细胞移植受损机体后的修复机理并不明确.为了实现角膜缘干细胞移植后的活体追踪,使用G418筛选标记有Venus荧光蛋白的角膜缘干细胞株(GLSC-V),并以其为种子细胞接种于去上皮羊膜上,体外培养21 d构建成荧光角膜上皮植片.荧光倒置显微镜下观察GLSC-V的细胞质和细胞核均有绿色荧光表达,在体外培养荧光至少持续3个月.免疫荧光检测GLSC-V细胞P63、Integrinβ1均呈阳性表达,对GLSC-V细胞及未转染的GLSCs进行半定量RT-PCR检测显示,两组细胞皆未表达终末分化角膜上皮细胞基因k3、k12,GLSC-V中p63及pcna较未转染组细胞略上调,venus强表达.经HE染色观察构建的人工角膜组织由5~6层上皮细胞组成,组织中上表皮细胞个数少、体积大且呈扁平状;基底部细胞密集,体积小且成立方状.经免疫荧光检测仅组织基底部最基层细胞表达P63,上表皮细胞不表达.该人工角膜与正常角膜上皮组织结构特性相似,可用于移植,为研究角膜缘干细胞修复严重受损角膜上皮机理奠定基础.
Author: Jiqing Yin Wenqiang Liu Chao Liu Guimin Zhao Yihua Zhang Weishuai Liu Jinlian Hua Zhongying Dou Anmin Lei
作者单位: 西北农林科技大学动物医学院,陕西省干细胞工程技术研究中心,杨凌,712100 杨凌示范区医院病理科,杨凌,712100
刊 名 生物工程学报 ISTICPKU
年,卷(期): 2010, 26(12)
分类号: S8
机标分类号: R77 R-3
基金项目: 国家高技术研究发展计划(863计划)项目