新生昆明小鼠胰腺巢蛋白阳性细胞的自然分化
Natural differentiation of pancreatic Nestin-positive cells in neonatal Kunming mice
摘要 背景:胰腺干细胞在常规培养条件下易于分化,难以获得足够数量的种子细胞.目的:探讨体外培养条件下小鼠胰腺内、外分泌部的巢蛋白阳性细胞的分化情况.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-08/2007-08在广西医科大学基础医学院中心实验室完成.材料:SPF级新牛昆明系小鼠25只,由广西医科大学实验动物中心提供.方法:以Ⅳ型胶原酶消化小鼠胰腺组织,采用Percoll不连续密度梯度法分离单个细胞混悬液,分别从第1界而(磷酸盐缓冲液/1.068 g/L Percoll液)、第2界面(1.068 g/L Percoll液,1.096 g/L Percoll液)、第3界面(1.096 g/L Percoll液/1.118 g/L Percoll液)收集细胞,添加角质细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的低糖DMEM培养基进行体外连续培养.主要观察指标:双硫腙染色判断各界面细胞的来源,免疫组织化学检测各界面细胞巢蛋白、胰十二指肠同源盒基因蛋白1,角蛋白19的表达.结果:从第1,2界面收集到的细胞80%~90%双硫腙染色后胞质呈铁红色,表明主要来源于胰腺的内分泌部:从第3界面收集到的细胞双硫腙染色后胞质不染色,表明来源于胰腺的外分泌部.从胰腺的内、外分泌部均可分离出大、圆、单个核的细胞,巢蛋白染色呈阳性表达.随着体外培养时间的延长,来源于胰腺内分泌部的巢蛋白阳性细胞形态保持不变,呈集落样生长.表达胰十二指肠同源盒基因蛋白1,有向胰腺内分泌部β-细胞分化的趋势;来源于胰腺外分泌部的巢蛋白阳性细胞争铺路石样形态,表达细胞角蛋白19,出现向导管上皮细胞分化的趋势.结论:新生昆明小鼠胰腺的内分泌部和外分泌部均存在巢蛋白阳性的细胞,前者具有分化为β-细胞的能力,后者具有分化为导管上皮细胞的能力.
Author: Ye Jian He Shao-jian Liu Qiong-dong Chen Wei-ping Mo Si-en Yuan Lu Hu Li-xia
作者单位: 广西壮族自治区人口与计划生育研究中心,广西壮族自治区南宁市,530021 广西医科大学组织学与胚胎学教研室,广西壮族自治区南宁市,530021
年,卷(期): 2009, 13(14)
分类号: R394.2
关键词 胰腺 巢蛋白 分化
机标分类号: R33 R65
在线出版日期: 2009年5月22日
基金项目: 广西科技厅资助项目,广西计划生育委员会科研课题