关中奶山羊Prm1基因的克隆及真核表达
Cloning of Dairy Goat Prm1 Gene CDS and Construction of the Eukaryotic Expression Vector
摘要 [目的]研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础.[方法]利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较.同时用PCR、western blotting及免疫组化技术检测Prm1在不同年龄雄性关中奶山羊睾丸中的表达.将克隆出的奶山羊Prm1基因与pIRES-GFP载体连接构建重组真核表达载体,转染GCl细胞和人的脐带基质细胞检测Prm1基因的超表达情况.[结果]Prm1基因在成年奶山羊睾丸组织中的表达量很高,且只定位于精子头部,在其它时期的睾丸组织中基本不表达.同时扩增得到了关中奶山羊Prm1基因CDS序列,与其它物种比对,发现其与许多物种具有较高的同源性,与牛的同源性高达97.4%,最后在GCl细胞和人的脐带基质细胞中进行了超表达.[结论]得到了关中奶山羊Prml基因的表达规律及完整的CDS序列.
Author: LI Ming-zhao LIU Chao SUN Jun-wei ZHU Hai-jing CAO Hui L(U) Xiao QIU Pu-bin HUA Jin-lian
作者单位: 西北农林科技大学动物医学院/陕西省干细胞工程技术研究中心/农业部动物生物技术重点开放性实验室,陕西杨凌,712100
刊 名 中国农业科学 ISTICPKU
年,卷(期): 2012, 45(6)
分类号: S827
机标分类号: S81 S85
基金项目: 国家自然科学基金,教育部重点科研项目,中国博士后基金,中国博士后科学基金特别资助项目,留学回国人员科研启动费,陕西省科技攻关,西北农林科技大学青年学术骨干支持计划