骨髓间充质干细胞的定向与共培养体系诱导
目的:通过骨髓间充质干细胞的定向诱导,探讨其成脂、成神经等多分化潜能。利用共培养体系诱导骨髓间充质干细胞向胰岛祖细胞的初步转化,探讨骨髓间充质干细胞在糖尿病治疗领域的价值。 方法:骨髓间充质干细胞来源于5~10岁儿童胸骨骨髓血(排除造血系统疾病,经得家属同意)。Percoll淋巴细胞分层液分离骨髓间充质干细胞;第3代细胞经CD44抗体、CD45抗体、CD34抗体鉴定;第4代细胞采用含10<'-8>mmol/L地塞米松、10μg/L胰岛素的高糖DMEM(H-DMEM)诱导其向脂肪细胞分化,油红O染色鉴定脂肪细胞。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导其向神经祖细胞分化,经巢蛋...
目的:通过骨髓间充质干细胞的定向诱导,探讨其成脂、成神经等多分化潜能。利用共培养体系诱导骨髓间充质干细胞向胰岛祖细胞的初步转化,探讨骨髓间充质干细胞在糖尿病治疗领域的价值。 方法:骨髓间充质干细胞来源于5~10岁儿童胸骨骨髓血(排除造血系统疾病,经得家属同意)。Percoll淋巴细胞分层液分离骨髓间充质干细胞;第3代细胞经CD44抗体、CD45抗体、CD34抗体鉴定;第4代细胞采用含10<'-8>mmol/L地塞米松、10μg/L胰岛素的高糖DMEM(H-DMEM)诱导其向脂肪细胞分化,油红O染色鉴定脂肪细胞。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导其向神经祖细胞分化,经巢蛋白鉴定,继以1%二甲基亚矾(DMSO)的无血清H-DMEM诱导其形成神经网格样结构。 胶原酶消化法获取流产胎儿胰腺间充质细胞,用添加bFGF的无血清低糖DMEM(L-DMEM)使其增殖,然后将胰腺间充质细胞接种于底层已接种骨髓间充质干细胞的Transwell内板(insert),共培养法诱导骨髓间充质干细胞向胰岛祖细胞的初步转化。 建立骨髓间充质干细胞和神经干细胞共培养体系诱导神经干细胞分化为神经元。 结果:骨髓间充质干细胞体外经诱导可分化为脂肪细胞及神经细胞。胎儿胰腺间充质细胞中具有巢蛋白、CK-19阳性的胰腺干细胞,体外可分化形成胰岛样细胞团。共培养法可诱导骨髓间充质干细胞分化为PDX-1免疫反应阳性细胞。共培养体系能促进神经干细胞的分化。 结论: Percoll淋巴细胞分离液分离可获取骨髓间充质干细胞,体外诱导可分化为脂肪细胞、神经细胞。胎儿胰腺微环境能诱导骨髓间充质干细胞向胰岛祖细胞的转化。骨髓间充质干细胞分泌的一些物质对神经干细胞的分化具有促进作用。
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作者: 林鹏
学科专业: 内科学(内分泌学)
授予学位: 硕士
学位授予单位: 青岛大学
导师姓名: 杨乃龙
学位年度: 2007
语 种: chi
分类号: R587.1
在线出版日期: 2007年9月16日