胰腺干细胞的原位传代扩增培养方法及体内移植的初步探讨
目的:优化并稳定胰腺干细胞体外培养条件;比较不同成纤维细胞饲养层对胰腺干细胞扩增培养的效果,探索建立一种能够获得数量较多、富集度较高的胰腺干细胞的体外扩增培养方法;进行昆明小鼠体内移植实验,检测胰腺干细胞体内存活情况。<br>   方法:取新生SPF级昆明小鼠的胰腺组织,使用Ⅳ型胶原酶消化,细胞悬液培养和组织块培养,前两天用含10%FBS的DMEM培养液,以后改换无血清DMEM培养液培养;倒置相差显微镜下观察其形态学特征及生长特性,通过免疫细胞化学染色等技术和方法,检测胰腺干细胞特异性标志-Nestin,对胰腺干细胞进行初步鉴定。采用原位传代扩...
目的:优化并稳定胰腺干细胞体外培养条件;比较不同成纤维细胞饲养层对胰腺干细胞扩增培养的效果,探索建立一种能够获得数量较多、富集度较高的胰腺干细胞的体外扩增培养方法;进行昆明小鼠体内移植实验,检测胰腺干细胞体内存活情况。
   方法:取新生SPF级昆明小鼠的胰腺组织,使用Ⅳ型胶原酶消化,细胞悬液培养和组织块培养,前两天用含10%FBS的DMEM培养液,以后改换无血清DMEM培养液培养;倒置相差显微镜下观察其形态学特征及生长特性,通过免疫细胞化学染色等技术和方法,检测胰腺干细胞特异性标志-Nestin,对胰腺干细胞进行初步鉴定。采用原位传代扩增培养的方法获得富集度高的胰腺干细胞。将扩增的第二代胰腺干细胞行DAPI和Brdu标记后注入昆明小鼠腿部肌肉及侧脑室,于不同时间点通过免疫组织化学的方法观察其自然存活情况。
   结果:体外培养24h,出现典型的成纤维细胞,其密度不断增大,组织块培养1w,细胞悬液培养3~4d后胰腺成纤维细胞密度达到70%~80%时,此时胰腺干细胞逐渐出现,具有活跃的分裂增殖能力,表达特异性标志-巢蛋白(Nestin)。胰腺干细胞可进行多次原位传代扩增培养,富集度提高、保持未分化状态和旺盛的分裂增殖能力。对扩增后的第二代胰腺干细胞行DAPI标记后注入昆明小鼠腿部肌肉,一周后未检测到存活的胰腺干细胞,Brdu标记后的胰腺干细胞注入小鼠侧脑室后3d,检测到存活的胰腺干细胞,1w时逐渐减少,2w时未检测到标记后的胰腺干细胞。
   结论:
   (1)原位传代扩增培养方法可获得富集度较高的胰腺干细胞。
   (2)胰腺干细胞可在侧脑室内存活一周。
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作者: 胡利霞
学科专业: 组织学与胚胎学
授予学位: 硕士
学位授予单位: 广西医科大学
导师姓名: 陈维平
学位年度: 2010
语 种: chi
分类号: R329.2
在线出版日期: 2010年11月25日