新生大鼠胰腺干细胞的分离、培养、初步鉴定及其疗效
目的:①成功分离、培养及初步鉴定新生大鼠胰腺干细胞。②建成可靠、稳定的1型大鼠糖尿病模型,并将胰腺干细胞成功移植入大鼠体内,使其分泌胰岛素,降低血糖。③为利用胰腺干细胞移植治疗糖尿病提供实验依据。<br>   方法:①取SPF级新生大鼠的胰腺组织,用完整胰腺胶原酶消化法分离胰岛。②以低糖DMEM为基础培养液,于不同时期分别添加血清、bFGF、EGF、ITS、LIF、N2、B27等进行培养,倒置相差显微镜下观察其形态学特征及生长特性。③应用免疫细胞化学法对培养不同时期的细胞进行Nestin及CK19检测,进行初步鉴定。④给予雄性Wistar大鼠一次性腹腔注射STZ(Streptozotoci...
目的:①成功分离、培养及初步鉴定新生大鼠胰腺干细胞。②建成可靠、稳定的1型大鼠糖尿病模型,并将胰腺干细胞成功移植入大鼠体内,使其分泌胰岛素,降低血糖。③为利用胰腺干细胞移植治疗糖尿病提供实验依据。
   方法:①取SPF级新生大鼠的胰腺组织,用完整胰腺胶原酶消化法分离胰岛。②以低糖DMEM为基础培养液,于不同时期分别添加血清、bFGF、EGF、ITS、LIF、N2、B27等进行培养,倒置相差显微镜下观察其形态学特征及生长特性。③应用免疫细胞化学法对培养不同时期的细胞进行Nestin及CK19检测,进行初步鉴定。④给予雄性Wistar大鼠一次性腹腔注射STZ(Streptozotocin,链脲佐菌素)液65㎎/kg,7d后血糖>16.65mmoL/L判定为1型糖尿病动物模型。⑤将成模的大鼠分为两组,实验组接受腹腔移植胰腺干细胞,移植细胞数约为2×10个,对照组移植不含细胞的培养液。两组大鼠均于移植前48h测定空腹血糖,移植后每周测空腹血糖1次。
   结果:①新生大鼠胰腺内纤维组织少,体积小,完整胰腺胶原酶消化法简化了胰岛分离步骤,减少了污染机会,有利于进一步培养。②在培养的24h可见细胞贴壁,但贴壁细胞数量较少,改用无血清培养后,贴壁细胞快速长,10-15d形成单层细胞汇集,细胞形态较一致。③培养所得细胞一直较多表达胰腺干细胞的标志-Nestin,随培养时间延长,表达CK-19的细胞数量逐渐增多。④大鼠注射STZ7d后,大部分血糖值达到成模标准。⑤实验组大鼠移植3周后血糖开始有不同程度下降,但未降至正常范围。
   结论:①新生大鼠胰腺消化后,获得的细胞于不同时期表达胰腺干细胞的标志-Nestin、CK-19,此细胞可连续传代。②腹腔一次注射STZ可成功制备1型糖尿病大鼠模型。③胰腺干细胞经腹腔移植后,具有一定的抗大鼠糖尿病作用。
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作者: 张巨彪
学科专业: 外科学
授予学位: 硕士
导师姓名: 欧阳晓晖 苏秀兰
学位年度: 2010
语 种: chi
分类号: Q813 R587.1
在线出版日期: 2010年12月22日