胰腺干细胞增殖能力的观察
第一部分人胎儿胰岛样细胞簇体外增殖能力的研究目的:探讨人胎儿胰岛样细胞簇体外增殖能力。 方法:取引产的16周人胚胎胰腺组织,分离胰岛样细胞簇(Islet-likecellclusters,ICCs)进行体外培养。采用5溴2脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxyuridine,Brdu)掺入法以及流式细胞仪PI标记方法观察细胞增殖能力,采用免疫组化技术,应用角蛋白抗体18(cytokeratin,CK18),巢蛋白(nestin)抗体,CD99抗体,insulin抗体对培养的ICC细胞进行检测,研究ICC细胞体外增殖和向胰岛内分泌细胞分化的能力。 结果:胎儿胰腺组织经过分离得到胰岛样细胞簇,双硫腙染色,细胞团呈...
第一部分人胎儿胰岛样细胞簇体外增殖能力的研究目的:探讨人胎儿胰岛样细胞簇体外增殖能力。 方法:取引产的16周人胚胎胰腺组织,分离胰岛样细胞簇(Islet-likecellclusters,ICCs)进行体外培养。采用5溴2脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxyuridine,Brdu)掺入法以及流式细胞仪PI标记方法观察细胞增殖能力,采用免疫组化技术,应用角蛋白抗体18(cytokeratin,CK18),巢蛋白(nestin)抗体,CD99抗体,insulin抗体对培养的ICC细胞进行检测,研究ICC细胞体外增殖和向胰岛内分泌细胞分化的能力。 结果:胎儿胰腺组织经过分离得到胰岛样细胞簇,双硫腙染色,细胞团呈红色;体外培养后,可获得巢蛋白阳性细胞,该类细胞有较强的增殖能力,细胞倍增时间2.1天;ICC细胞经BrdU染色显示掺入率达70%,经nestin组化染色显示60%以上的细胞呈现染色阳性;经CD99,CK18染色结果显示阳性细胞分别达30%。;传代6代以上的细胞,经insulin染色阳性细胞占10%;本研究的细胞目前传代至18代。 结论:来自于胎儿胰腺组织的ICC,含有大量的胰腺干细胞,可长期传代体外培养。体外培养的胰腺干细胞可以表达多种干细胞及增殖性核抗原的标记,培养的ICC具有向内分泌细胞分化的潜能。 第二部分1型糖尿病C57鼠模型胰腺增殖能力研究及转染GFP的胎儿胰腺干细胞在模型鼠肝脏中的分布观察 目的:了解链尿菌素(Streptozotozin,STZ)诱导的1型糖尿病C57模型鼠胰腺组织细胞的增殖能力,观察转染GFP的胎儿胰腺干细胞在模型鼠肝脏中的分布观察 方法:用编码GFP浓缩的病毒上清液转染胰腺干细胞,经抗生素筛选后,并传代培养;C57小鼠按100mg/kg体重的剂量腹腔注射STZ液,4天后当血糖到25mmol/L以上时为典型的Ⅰ型糖尿病模型;按100mg/kg剂量腹腔注射5溴2'脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液,连续4天,之后灌注取材固定,冰冻切片,抗BrdU抗体,抗Ki67抗体,抗insulin抗体,抗角蛋白抗体免疫组化染色;将转染GFP的胰腺干细胞制备成单细胞悬液,经门静脉分支注射入肝。 结果:用编码GFP浓缩的病毒上清液转染胰腺干细胞,经抗生素筛选后阳性细胞比例达到60%以上;STZ鼠胰腺组织光镜下胰岛细胞数量减少,部分胰岛溶解,胰管结构破坏,部分小血管内有血栓性结构,间质水肿,胞浆空泡,实质出血伴坏死。 组化染色结果胰岛组织insulin染色细胞数量减少,分布凌乱;在胰腺腺管部位有大量表达Ki67的细胞,部分细胞复合表达Brdu;胰腺腺管有大量表达CK18的细胞,部分细胞同时呈现Brdu染色阳性;同样在胰腺腺管部位有大量表达nestin的细胞,部分细胞同时呈现Brdu染色阳性;胰腺组织Brdu及insulin染色结果显示,未见复合染色。在腺管部位可见Brdu染色阳性细胞。 转染GFP的胰腺干细胞经门静脉移植入肝后,分布在门管小叶、肝腺泡及肝小叶附近。经nestin染色显示移植进入的胰腺干细胞呈阳性表达。 结论:胰腺干细胞转染GFP的转染率可以达到60%,STZ诱导的1型糖尿病鼠其胰腺导管细胞出现反应性增殖,增殖细胞复合表达nestin及Brdu,CK18及Brdu,Ki67及Brdu;提示胰腺导管细胞具有干细胞的生物学特性及增殖能力。
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作者: 赵绵松
学科专业: 细胞治疗中心
授予学位: 博士后
学位授予单位: 首都医科大学
导师姓名: 张愚
学位年度: 2006
语 种: chi
分类号: R576 R587.1