固态发酵制备富细菌素和阿魏酸酯酶的饲料添加剂的方法

本发明公开一种固态发酵制备富细菌素和阿魏酸酯酶的饲料添加剂的方法,包括步骤:步骤一、液体发酵剂的制备;步骤二、固态发酵培养基的制备;步骤三、固态发酵;步骤四、富细菌素及阿魏酸酯酶饲料添加剂的制备。应用本发明方法,固态发酵同时产生细菌素和阿魏酸酯酶,有效提高了发酵效率,降低了生产成本,一次发酵得到两种目的产物,有效提高阿魏酸酯酶的产量,缩短发酵周期,简化工艺设备,降低成本,益于工业化生产应用;采用固态发酵生产细菌素和阿魏酸酯酶,大大减少液体发酵产生的污水,从根本上有效解决污水排放问题,非常有利于环境保护。

专利类型: 发明专利
申请(专利)号: CN202110439142.8
申请日期: 2021年4月23日
公开(公告)日: 2021年6月15日
公开(公告)号: CN112961812A
主分类号: C12N1/20,C,C12,C12N,C12N1
分类号: C12N1/20,C12N9/18,C12P21/02,A23K10/18,A23K20/189,A23K20/147,C12R1/07,C,A,C12,A23,C12N,C12P,A23K,C12R,C12N1,C12N9,C12P21,A23K10,A23K20,C12R1,C12N1/20,C12N9/18,C12P21/02,A23K10/18,A23K20/189,A23K20/147,C12R1/07
申请(专利权)人: 徐州工程学院
发明(设计)人: 丁飞鸿,张娜,高兆建,陈腾,耿云龙,赵宜峰,焦魏,张传丽,张建萍
主申请人地址: 221018 江苏省徐州市云龙区丽水路2号
专利代理机构: 徐州市三联专利事务所
代理人: 陈鹏
国别省市代码: 江苏;32
主权项: 1.一种固态发酵制备富细菌素和阿魏酸酯酶的饲料添加剂的方法,其特征在于,包括步骤: 步骤一、液体发酵剂的制备 a)菌种活化:取甘油冷冻保存的凝结芽孢杆菌菌株在牛肉膏蛋白胨培养基上初次划线后,30-37℃培养24-48h,从以上培养基上挑取单菌落再次重复在新的牛肉膏蛋白胨培养基上再次划线,同以上相同条件下培养,得到的单菌落备用; b)一级种子液体培养基培养:从第二次划线培养的培养基上挑取单菌落至种子液体培养基,培养条件为:150mL三角瓶装种子液体培养基10mL-20mL,pH为6.5-7.2,接种一环菌体,32-37℃震荡培养器按照140-210r/min震荡培养12-24h,得到一级种子液; 采用的种子液体培养基:牛肉膏4-10g、蛋白胨5-10g、酵母粉5-10g、葡萄糖10-20g、NaCl 0.05g、KH2PO4 0.1-0.2g、MgSO4·7H2O 0.04,蒸馏水加至1000mL,pH 7.0,121℃灭菌20min; c)制备液体发酵剂:按照6-12v/v%的接种量吸取培养好的一级种子液至液体发酵剂培养基中,培养条件为:80-200ml液体发酵剂培养基装在1000mL三角瓶中,在震荡培养器上按照180-210r/min震荡转速35-37℃下震荡培养12-20h,得到液体发酵剂; 采用的液体发酵剂培养基:花生粕粉5-10g、可溶性淀粉10-20g、葡萄糖5-10g、蛋白胨5-10g、(NH4)2SO4 1-2 g、MgS04·7H2O 0.01-0.02g、KH2PO4 0.1-0.2g,去离子水定容至l000ml,pH 7.0-7.4,121℃灭菌20min; 步骤二、固态发酵培养基的制备 a)固体基质:按质量份计,称取分别粉碎并过20-60目筛的豆粕20份、花生饼粉10份、麦麸40份、玉米粉20份、米糠5份、蛹虫草栽培菌糠4份、碳酸钙1份,混合备用; b)按照固体基质的质量配制液体培养基:酵母粉5-8g/kg,蛋白胨5-10g/kg,葡萄糖5-8g/kg,玉米浆干粉8-15g/kg,NH4NO3 1-5 g/kg,KH2PO4 0.5-1g/kg,吐温-80 0.5-1g/kg,MgSO4·7H2O 0.01-0.05g/kg,微量元素5-10ml/kg,pH 6.5-7.2; 所述微量元素包括:MnSO4·H2O 0.2-0.4g/L,FeSO4·7H2O 50-80mg/L,CoCl2·6H2O100-200mg/L,ZnSO4·7H2O 40-80mg/L,CuSO4·5H2O 30-50mg/L,H3BO3 10-20mg/L和NaMoO4·2H2O 5-10mg/L; c)将分别配制好的固体基质和液体培养基充分混合并添加去离子水,使料液比达到1:0.3~1:0.5,充分混匀后,装入3000ml的三角瓶,装量为200-300g,4-6层纱布封口,121℃灭菌20-40min,间歇灭菌2次,冷却后备用; 步骤三、固态发酵 将步骤一的液体发酵剂与步骤二的固态发酵培养基按照4-10ml/100g的用量混合均匀,采取分阶段精密控制发酵工艺:发酵0-12h,发酵培养箱温度控制在34-37℃;发酵12h-36h,期间震荡三角瓶4次,防止培养基结块,充分使菌体接触氧气,控制培养箱温度31-35℃,并每隔6h向三角瓶中添加液体补充培养基,每次添加10-30ml;发酵36-60h,震荡三角瓶4次,控制培养箱温度30-33℃,到发酵60h,结束发酵; 所述液体补充培养基包括:经蛋白酶部分水解后的豆粕粉10-20g、玉米浆干粉10-20g、蔗糖10-30g、蛋白胨10-20g,定容至1000mL,pH 7.5-8.0,121℃灭菌15min; 步骤四、富细菌素及阿魏酸酯酶饲料添加剂的制备 将发酵结束的发酵物在40-50℃低温气流下干燥至水分含量低于10%,然后粉碎、过筛,经检测合格后为成品,分装;经测定,在该发酵条件下,所得细菌素活力为712U/g曲料,阿魏酸酯酶667U/kg曲料。
法律状态: 公开