基于恒温隔绝式荧光PCR技术的猪流行性腹泻病毒检测方法的建立及应用
Establishment and application of a method for detection of porcine epidemic diarrhea virus based on insulated isothermal PCR
摘要 为建立猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)快速检测方法,参照GenBank中PEDV的N基因序列,设计引物及TaqMan探针,优化反应条件,建立了快速检测PEDV的荧光RT-PCR方法,并验证该法的敏感度、特异性和重复性.结果显示:该方法最佳反应体系为上游引物各1.5 μL,下游引物各1.8 μL,探针0.7 μL,酶1μL,缓冲液12.5 μL,模板2μL,补足DEPC水至25μL,获得的标准曲线方程为Ct=-3.15×lg拷贝数+31.72,检测PEDV的敏感度可达0.32 TCIDs0/100 μL,特异性好,对其他猪常见病毒检测结果均为阴性.结果表明:该方法适合猪流行性腹泻快速检测,为该病的诊断和防控奠定了基础.
Author: YU Xinyou LI Tianzhi WU Xinming WANG Jinliang
作者单位: 山东绿都生物科技有限公司,山东滨州,256600 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600
刊 名 畜牧与兽医 ISTICPKU
年,卷(期): 2018, 50(10)
分类号: S855.3
在线出版日期: 2018年11月9日
基金项目: 山东省自然科学基金