山羊伪结核棒状杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用
Establishment and preliminary application of TaqMan real-time PCR for detection of Corynebacterium pseudotuberculosis in goats
摘要 为了快速检测无临床症状的山羊是否感染山羊伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis),根据GenBank中伪结核棒状杆菌磷脂酶D(phospholipase D,PLD)基因序列,分别设计1对特异性引物和TaqMan探针,经过反应条件和体系优化,测定特异性、敏感性和稳定性,建立山羊伪结核病TaqMan荧光定量PCR检测方法,并对54份临床样品进行检测.结果显示:建立的山羊伪结核棒状杆菌方法具有很好的特异性,在20 μL扩增体系中,引物浓度为0.20 μmol/mL,探针浓度为0.45 μmol/mL,退火温度59℃时最佳;最低可检测出4.6× 102个拷贝数的细菌DNA,标准曲线相关系数是0.996.同时,对TaqMan荧光定量PCR和常规PCR进行了比较,前者的敏感性是后者的1 000倍;对54份临床样品进行检测,TaqMan荧光定量PCR检出的阳性率为68.5% (37/54),常规PCR检出的阳性率为53.7% (29/54).研究表明:TaqMan荧光定量PCR法检出率较高,有特异、敏感且快速的特点,适用于临床样品的检测.
Author: MA Yuxin LI Wengui ZHENG Guoying WU Peikun SHAO Qingyong LI Zhiming GAO Huafeng
作者单位: 云南农业大学,云南昆明650201;云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明650024 云南农业大学,云南昆明,650201 昆明市西山区畜牧兽医站,云南昆明,650101 云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明,650024
刊 名 畜牧与兽医 ISTICPKU
年,卷(期): 2018, 50(10)
分类号: S855.1
在线出版日期: 2018年11月9日
基金项目: 昆明市西山区2016年度科技项目,国家现代肉羊产业技术体系项目