重组高分泌型枯草芽孢杆菌重组表达系统的开发与应用
成果信息
项目年度编号: 1800290086
限制使用: 国内
省市: 江苏
中图分类号: TQ925
成果类别: 应用技术
成果公布年份: 2018
关键词: 工业酶制剂 枯草芽孢杆菌 分泌表系统
成果简介: 围绕工业酶制剂研究和生产领域重组酶蛋白高效分泌表达这一问题,开展系统攻关,分析筛选酶高表达载体关键元件,探讨酶分泌转运机制,改造分泌途径和分泌元件,建立了适应性强、通用性好的枯草芽孢杆菌高效分泌系统。 通过转录组学理论和方法结合,通过比较启动子活性,构建串联启动子,筛选信号肽库等构建了一种B. subtilis新型的高效分泌表系统。 在PsrfA自诱导启动子的基础上对其进行定向进化和理性改造,获得一系列转录活性提高的启动子突变体,进一步增强了NK,GFP等重组蛋白质的表达水平,相比野生型PsrfA启动子,表达水平普遍提高1~2倍。推动了PsrfA启动子作为即插即用元件普遍应用于重组枯草杆菌表达多种工业用蛋白质。 建立了一种启动子理性设计的策略。通过对前期筛选得到的6种高活性启动子的核心区进行串联,构建出了已系列核心区杂化重复的人工合成启动子。通过报告基因的验证以及目标的蛋白的检测,鉴定出了多种转录活性驱动的重组蛋白大幅提高的基因表达元件。其中,PHpaII-PHpaII用NK进行验证的条件下,重组蛋白的纤溶活性为19.94万FU/Ml较PHpaII提高了80%。
申报信息
计划名称: ^A863计划
相关人信息
完成单位: 江南大学 华南理工大学 无锡佰翱得生物科学有限公司 江苏一鸣生物股份有限公司
完成人: 周哲敏
行业及专利信息
应用行业名称: 生物、生化制品的制造
应用行业码: 276
转让信息
投资信息
推广信息
联系信息
联系单位名称: 江南大学
联系单位地址: 江苏省无锡市蠡湖大道1800号
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