通过生长测量的质谱法抗药性测定

本发明涉及一种测定微生物对抗生素的抗药性的质谱方法,所述方法包括在含有抗生素的培养基中培养微生物,将至少一种参考物质按剂量添加到含有所述抗生素的培养基中,其中所述至少一种参考物质不被所述微生物吸收或分解,并且在培养微生物之后采集微生物质谱MScum。本方法的特点是,通过在质谱中共测的参考物质来通过质谱测定在培养期间出现的任何微生物生长,其中微生物生长表明对抗生素有抗药性。

专利类型: 发明专利
申请(专利)号: CN202010074822.X
申请日期: 2014年4月3日
公开(公告)日: 2020年6月9日
公开(公告)号: CN111254185A
主分类号: C12Q1/18,C,C12,C12Q,C12Q1
分类号: C12Q1/18,G01N33/68,C,G,C12,G01,C12Q,G01N,C12Q1,G01N33,C12Q1/18,G01N33/68
申请(专利权)人: 布鲁克道尔顿有限公司
发明(设计)人: 克里斯托弗·朗格,卡特里·斯帕比尔
主申请人地址: 德国不来梅
专利代理机构: 北京天昊联合知识产权代理有限公司
代理人: 高钊,王静
国别省市代码: 德国;DE
主权项: 1.一种用质谱测定微生物对抗生素的抗药性的方法,其中在含有所述抗生素的培养基中培养所述微生物,所述方法包括: 将至少一种参考物质按剂量添加到含有所述抗生素的培养基中,其中所述至少一种参考物质不被所述微生物吸收或分解; 在包含抗生素的培养基中培养所述微生物后,采集所述微生物的质谱MScum,其中在所述质谱MScum中也测量所述至少一种参考物质(共测); 通过首先从质谱MScum中测定在包含抗生素的培养基中培养后的微生物的数量,然后将此数量与在培养前对应测定的微生物或标准化的微生物数量和/或在无抗生素培养基中培养后对应测定的微生物数量进行比较,从而测定微生物的生长,其中使用所述至少一种参考物质的一种或多种参考信号的强度,根据质谱MScum的一种或多种微生物信号的强度测定微生物的数量;以及 在包含所述抗生素的培养基中的微生物生长表明对所述抗生素有抗药性。 2.根据权利要求1所述的方法,其中将所述至少一种参考物质在培养之前、期间或之后添加至所述培养基中。 3.根据权利要求1所述的方法,其中所述微生物的细胞的数量在培养之前小于104个。 4.根据权利要求1所述的方法,其中所述微生物的培养体积介于1μl和1ml之间。 5.根据权利要求1所述的方法,其中在包含不同抗生素的混合物的培养基中培养所述微生物。 6.根据权利要求1所述的方法,其中所述至少一种参考物质由于高的质子亲和力从而易于电离,使得其电离不会受微生物蛋白质的抑制。 7.根据权利要求1所述的方法,其中所述至少一种参考物质的质量介于10千道尔顿和20千道尔顿。 8.根据权利要求1所述的方法,其中所述至少一种参考物质能够有效电离,并且提供多个可识别的参考信号。 9.根据权利要求1所述的方法,其中将覆盖一定浓度范围的参考物质的混合物加入包含所述抗生素的培养基中。 10.根据权利要求9所述的方法,其中浓度最高的参考物质在质谱MScum中产生的参考信号的高度(强度)与微生物在充分且不受抑制的生长后的最高微生物信号的高度(强度)大约相同。 11.根据权利要求1所述的方法,其中在各自含有不同浓度的抗生素的多种培养基内同时培养所述微生物。 12.根据权利要求11所述的方法,其中所述抗生素的浓度范围介于1MIC(最低抑制浓度)至100MIC之间。 13.根据权利要求1至12中任意一项所述的方法,其中通过下列方法采集所述质谱:基质辅助激光解吸电离法(MALDI)、电喷雾电离(ESI)、解吸电喷雾电离(DESI)、或化学电离与中性喷雾法以及固体样本的激光消融法的结合使用。
法律状态: 公开,公开