用于治疗视网膜疾病的组合物及方法

本文公开了组合物和方法,其用于通过施用视网膜祖细胞来治疗、缓解或者预防视网膜疾病或病症;改善明(日光)视觉;用于改善矫正视敏度,改善黄斑功能,改善视野,或者改善暗(夜)视觉。本文所述的主题还提供包含视网膜祖细胞的细胞群及其分离方法。

专利类型: 发明专利
申请(专利)号: CN202010080407.5
申请日期: 2012年5月17日
公开(公告)日: 2020年6月12日
公开(公告)号: CN111265551A
主分类号: A61K35/30,A,A61,A61K,A61K35
分类号: A61K35/30,A61K9/00,A61P27/06,A61P27/02,A61P9/10,A61P27/10,C12N5/079,C12N5/0797,A,C,A61,C12,A61K,A61P,C12N,A61K35,A61K9,A61P27,A61P9,C12N5,A61K35/30,A61K9/00,A61P27/06,A61P27/02,A61P9/10,A61P27/10,C12N5/079,C12N5/0797
申请(专利权)人: 加利福尼亚大学董事会
发明(设计)人: 亨利·克拉森,杨静
主申请人地址: 美国加利福尼亚州
专利代理机构: 北京世峰知识产权代理有限公司
代理人: 康健,王思琪
国别省市代码: 美国;US
主权项: 1.包含不是永生的人视网膜祖细胞的细胞群,其中所述细胞群通过以下步骤制备: 机械消化和/或酶消化从大约12周至大约28周孕龄的人中获得的人视网膜组织的样品,以产生解离的细胞和/或细胞团的混悬物;和 在大约2%、2.5%、3%或3.5%氧条件下,在无动物产品的纤连蛋白包被的培养瓶或培养板中的无血清培养基中培养所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物持续(1)大约10-30代或(ii)不超过10代, 其中在每次传代时用酶处理以解离所述细胞来使所述细胞传代, 由此制备所述细胞群, 其中:在培养后,所述细胞群中大于90%的细胞表达巢蛋白, 所述细胞群中大于80%的细胞表达性别决定区Y框蛋白2(Sox2), 所述细胞群中大于70%的细胞表达主要组织相容性复合体1类(MHC I类),或它们的组合。 2.根据权利要求1所述的细胞群,其中在大约3%氧条件下培养所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物。 3.根据权利要求1或2所述的细胞群,其中所述细胞群中1-3%的细胞表达MHC II类。 4.根据权利要求1-3任一项所述的细胞群,其中所述细胞群中大于30%的细胞表达Ki-67,任选地,所述细胞群中40-60%的细胞表达Ki-67。 5.根据权利要求1-4任一项所述的细胞群,其中所述细胞群中大于30%的细胞表达Fas/分化簇95(CD95)。 6.根据权利要求1-5任一项所述的细胞群,其中所述酶是胰蛋白酶或等效物。 7.根据权利要求1-6任一项所述的细胞群,其中所述细胞还表达选自由以下组成的组的一种或更多种标志物:波形蛋白、CD9、CD81、AQP4、CXCR4、CD15/LeX/SSEA1、GD2神经节苷脂、CD133、β3-微管蛋白、MAP2、GFAP、OPN/SPP1、PTN、KDR、和TEK。 8.在治疗受试者中视网膜疾病或病症中供使用的制剂、制造的产品或组合物: 其中所述制剂、制造的产品或组合物包含含有不是永生的人视网膜祖细胞的细胞群和药学上可接受的载体,其中所述细胞群通过以下步骤制备: 机械消化和/或酶消化从大约12周至大约28周孕龄的人中获得的人视网膜组织的样品,以产生解离的细胞和/或细胞团的混悬物;和 在大约2%、2.5%、3%或3.5%氧条件下,在无动物产品的纤连蛋白包被的培养瓶或培养板中的无血清培养基中培养所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物持续(1)大约10-30代或(ii)不超过10代, 其中在每次传代时用酶处理以解离细胞来使细胞传代, 由此制备所述细胞群, 其中:在培养后,所述细胞群中大于90%的细胞表达巢蛋白, 所述细胞群中大于80%的细胞表达性别决定区Y框蛋白2(Sox2), 所述细胞群中大于70%的细胞表达主要组织相容性复合体1类(MHC I类),或它们的组合。 9.根据权利要求8的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中在大约3%氧条件下培养所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物。 10.根据权利要求8或9的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中所述细胞群中1-3%的细胞表达MHC II类。 11.根据权利要求8-10任一项的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中所述细胞群中大于30%的细胞表达Ki-67,任选地,所述细胞群中40-60%的细胞表达Ki-67。 12.根据权利要求8-11任一项的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中所述细胞群中大于30%的细胞表达Fas/分化簇95(CD95)。 13.根据权利要求8-12任一项的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其进一步包含1000至10,000,000个细胞/剂量。 14.根据权利要求8-13任一项的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中所述受试者是人。 15.根据权利要求8-14任一项的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物培养持续不超过大约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10代。 16.根据权利要求8-15任一项的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中所述制剂、制造的产品或组合物被配制成用于注射到所述受试者的玻璃体腔或者视网膜下间隙内。 17.根据权利要求8-16任一项的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中所述视网膜疾病或病症包括视网膜色素变性(RP)、莱伯先天性黑朦(LCA)、斯塔加特病、乌斯赫尔氏综合征、无脉络膜、视杆-视锥或者视锥-视杆营养不良、纤毛病、线粒体病、进行性视网膜萎缩、退行性视网膜病、年龄相关黄斑变性(AMD)、湿性AMD、干性AMD、地图样萎缩、家族性或者后天获得性黄斑病、视网膜光感受器疾病、基于视网膜色素上皮的疾病、糖尿病视网膜病变、黄斑囊样水肿、葡萄膜炎、视网膜脱离、外伤性视网膜损伤、医源性视网膜损伤、黄斑裂孔、黄斑毛细血管扩张症、神经节细胞疾病、视神经细胞疾病、青光眼、视神经病、缺血性视网膜疾病、早产儿视网膜病变、视网膜血管阻塞、家族性大动脉瘤、视网膜血管病、眼血管病、血管疾病、或者缺血性视神经病。 18.根据权利要求8-17任一项的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中所述酶是胰蛋白酶或等效物。 19.根据权利要求8-18任一项的供使用的制剂、制造的产品或组合物,其中所述制剂、制造的产品或组合物中的细胞还表达选自由以下组成的组的一种或更多种标志物:波形蛋白、CD9、CD81、AQP4、CXCR4、CD15/LeX/SSEA1、GD2神经节苷脂、CD133、β3-微管蛋白、MAP2、GFAP、OPN/SPP1、PTN、KDR、和TEK。 20.制造包含不是永生的人胎儿神经视网膜细胞的异质混合物的组合物的方法,其包括以下步骤: (a)机械解离和/或酶解离从大约12周至大约28周孕龄的人中获得的人视网膜组织细胞的样品,以产生解离的细胞和/或细胞团的混悬物, 其中,使用胰蛋白酶或等效物对所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物进行酶解离;和 (b)在大约2%、2.5%、3%或3.5%氧条件下,在包括无动物产品的纤连蛋白包被的培养瓶或培养板中的无血清培养基的无菌环境中培养所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物持续(1)大约10-30代或(ii)不超过10代。 21.根据权利要求20所述的方法,其中在大约3%氧条件下培养所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物。 22.根据权利要求20或21所述的方法,其中所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物培养持续不超过大约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10代。 23.根据权利要求20-22任一项所述的方法,进一步包括: (a)基于细胞的表面标志物或者遗传标志物选择所述细胞,任选地,在培养之前(预期性地)或者培养之后或者在培养之前和之后都选择所述细胞, (b)基于人胎儿神经视网膜细胞的转录组谱、蛋白质组谱和/或基因组谱选择所述细胞。 24.根据权利要求20-23任一项所述的方法,其中在40-90%汇合时将所述细胞传代,在每次传代时用酶处理所述细胞以解离所述细胞,并且约每1-2天更换培养基。 25.分离不是永生的人视网膜祖细胞的细胞群的方法,所述方法包括以下步骤: 机械解离和/或酶解离从下述阶段分离的人视网膜组织的样品以产生解离的细胞和/或细胞团的混悬物:在视网膜形成之后但在光感受器外节在整个视网膜内完全形成之前并且在视网膜血管形成完成或者基本完成之前;和 在大约2%、2.5%、3%或3.5%氧条件下培养所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物持续(1)大约10-30代或(ii)不超过10代, 由此制备所述细胞群, 其中:在所述培养后,所述细胞群中大于90%的细胞表达巢蛋白, 所述细胞群中大于80%的细胞表达性别决定区Y框蛋白2(Sox2), 所述细胞群中大于70%的细胞表达主要组织相容性复合体1类(MHC I类),或它们的组合。 26.权利要求25所述的方法,其中在大约3%氧条件下培养所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物。 27.根据权利要求25或26所述的方法,其中所述细胞群中1-3%的细胞表达MHC II类。 28.根据权利要求25-27任一项所述的方法,其中所述细胞群中大于30%的细胞表达Ki-67,任选地,所述细胞群中40-60%的细胞表达Ki-67。 29.根据权利要求25-28任一项所述的方法,其中所述细胞群中大于30%的细胞表达Fas/分化簇95(CD95)。 30.根据权利要求25-29任一项所述的方法,其中所述酶是胰蛋白酶或等效物。 31.根据权利要求25-30任一项所述的方法,其中所述解离的细胞和/或细胞团的混悬物培养持续不超过大约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10代。 32.根据权利要求25-31任一项所述的方法,其中所述人视网膜组织来自大约12周至大约28周孕龄的人胎儿视网膜。 33.根据权利要求25-32任一项所述的方法,其中所述细胞还表达选自由以下组成的组的一种或更多种标志物:波形蛋白、CD9、CD81、AQP4、CXCR4、CD15/LeX/SSEA1、GD2神经节苷脂、CD133、β3-微管蛋白、MAP2、GFAP、OPN/SPP1、PTN、KDR、和TEK。 34.根据权利要求25-33任一项所述的方法,其中在40-90%汇合时将细胞传代,并在每次传代时用酶处理以解离所述细胞,并且约每1-2天更换培养基。
法律状态: 公开,公开