| 成果简介： |
1、课题来源与背景：该项目为自选课题。黑老虎为木兰科植物厚叶五味子 Kadsura coccinea (Lem) A. C. Smith。又叫钻朗风、大钻、冷饭团等，生于山谷、疏林中。具有镇痛、镇静、消炎的作用，中医临床用于治疗风湿骨痛、跌打肿痛、胃痛、急性肠炎、疝气、产后腹痛、痛经等症疗效显著，多次被国家列为中药保护品种。黑老虎为多年生木质常绿藤本植物，茎蔓茂盛，叶片终年翠绿，遮阴效果好，适合套种阴生药材，其幼果青绿色，成熟时颜色深红，极具观赏性，因此颇受世人青睐。一直以来，黑老虎药材完全依赖野生资源，以采挖全株为代价，植物的繁殖主要以实生繁殖为主，由于植株结实性差，野生动物爱吃其果实，因此种子存有量少且出芽率低，导致其繁殖速度十分缓慢，更有甚者，民间灭绝式采挖，已造成国内外野生资源濒危。有关黑老虎的组织培养报道较少，特别是尚未有采用叶片作为外植体培养的相关报道。
2、技术原理及性能指标：该发明公开了一种黑老虎的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：A、外植体的选择与处理：取靠近黑老虎茎尖顶端的幼嫩叶片，消毒处理后得无菌外植体；B、外植体的诱导；C、愈伤组织的防褐化处理；D、愈伤组织的分化；E、继代增殖培养；F、壮苗培养；G、生根培养；H、炼苗与移栽。该发明的组培方法将黑老虎外植体褐化率控制在7%以下，生根率达到95%，成苗率达到97%以上。
3、技术的创造性与先进性：
(1)该发明的组培方法简单、根质量好，易于移栽成活，采用叶片为外植体，不仅取材方便，而且节约了茎段避免了整株采集，有利于黑老虎资源的保护，也能满足市场对黑老虎药材的需求。
(2)繁殖速度快，培育周期短，不受季节限制，可实现工厂化育苗，且组织培养育苗的种苗遗传稳定性好。
(3)采用防褐化培养基处理，降低了外植体的褐化率，另外，外植体诱导培养之前，将外植体置于浸泡液中超声处理，利用维生素C、芸香苷为抗氧化剂，聚乙烯吡咯烷酮、活性炭为抗吸收剂抗褐化处理，咖啡碱有助于减轻伤口处的褐化程度，木犀草素和石决明粉具有抑制多种病菌以及增强外植体的免疫功能的作用。
(4)将刀片两侧涂抹0.5-1mm厚的凝胶剂，对切割过程中的黑老虎组织进行防褐化保护，其中凝胶剂中的魔芋精粉具有抑菌和保水的作用，蜂蜜能促进褪黑激素的生成，杨梅素和迷迭香酸具有抗氧化作用和清除自由基，防止细胞氧化损伤致褐化的作用，迷迭香酸还具有抑菌作用，竹醋液具有抑菌和促进组织细胞生长，促进其他物质渗透被细胞吸收的作用，木耳多糖具有提高细胞组织免疫力和保护组织损伤的作用，磁化水具有抑菌、促进组织发育、生根、茁壮生长的作用。
(5)生根培养基中还包括促生根营养液，其能有效提高外植体的生根率和成苗率，玉米素为植物激素，促进外植体生根、发芽，磷酸二氢铵补充磷素，促进外植体生根量增多，小檗碱抗菌谱广，可以防止外植体在生根生长过程中遭受病菌侵染而致使成苗率降低，芦荟汁液为芦荟的汁液，具有保湿、杀菌，提高细胞组织生命力的作用。
(6)幼苗移栽后定量适时的喷施促生长营养液，可以促进幼苗根系生长，茎杆粗壮，有利于加快幼苗出圃的速度，缩短培育时间，其中，圣女果含有谷胱甘肽和番茄红素，还富含维生素A、维生素C、维生素B1、维生素B2以及胡萝卜素和钙、磷、钾、镁、铁、锌、铜和碘等多种元素，还含有蛋白质、糖类、有机酸、纤维素，具有抑制细菌、促进生长、增强幼苗生命力的作用，筋骨草粉碎后加入到圣女果中一起蜜制，促进圣女果中有益成分的溶出，并对促进幼苗生长具有协同作用；竹醋液具有促进根和幼苗生长的作用，还具有一定的抗菌性。
4、技术的成熟程度，适用范围和安全性：该发明涉及黑老虎的培育领域，具体涉及一种黑老虎的组织培养快速繁殖方法，该成果可在科研院校和生产上推广，实用性强，对环境友好。 |
