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[目的]马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)是马兜铃酸类中毒性较强的单体成分,广泛存在于多种中草药中,其肾毒性已明确,但肝毒性机制尚未系统阐明.铁死亡是铁依赖性脂质过氧化驱动的新型细胞死亡方式,在多种器官损伤中发挥关键作用.本研究旨在探讨AAⅠ是否通过诱导铁死亡引发肝损伤,并阐明其分子机制,为AAⅠ肝毒性防控与靶向干预提供理论依据.[方法]本研究采用体内、体外相结合的试验策略.体内试验将C57BL/6小鼠随机分为4组:空白对照组、AAⅠ低、中、高剂量组,每组8只,其中AAⅠ低、中、高剂量组小鼠每日分别按2、5、10 mg/kg BW剂量灌胃给予AAⅠ溶液,空白对照组小鼠灌胃等体积0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)混悬液.各组连续灌胃28 d,检测小鼠体重、肝脏指数、血清肝功能指标,观察小鼠肝组织病理学变化、铁沉积,检测肝脏炎症因子及氧化应激水平,检测铁代谢、铁死亡及炎症相关基因与蛋白表达,透射电镜观察线粒体超微结构.体外试验以AAⅠ干预小鼠AML12肝细胞,首先设置空白对照组、AAⅠ低(10 μmol/L)、中(30 μmol/L)、高(50 μmol/L)剂量组,每组3个重复,探究不同浓度AAⅠ对肝细胞的损伤作用,检测细胞活力、活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位及细胞中铁死亡与炎症相关分子表达.为明确铁死亡在AAⅠ致肝细胞损伤中的介导作用,本试验进一步引入铁死亡特异性抑制剂铁抑素-1(Fer-1)开展干预验证试验,另设空白对照组、Fer-1 单独处理组(1 mmol/L)、AAⅠ高剂量组(50 μmol/L)、AAⅠ高剂量+Fer-1联合处理组(AAⅠ 50 μmol/L+Fer-1 1 mmol/L),同步检测上述铁死亡及炎症相关指标,通过对比抑制剂干预前后各项指标变化,证实铁死亡参与AAⅠ诱导的肝细胞损伤过程.[结果]体内试验结果显示,与空白对照组相比,中、高剂量 AAⅠ可显著抑制小鼠体重增长(P<0.05),显著升高肝脏指数(P<0.05),显著增加血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)活性(P<0.05),且呈剂量依赖性升高;与对照组相比,AAⅠ中、高剂量组小鼠肝组织出现水肿、空泡变性、炎性浸润及局灶性坏死;小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性显著降低(P<0.05),丙二醛(MDA)、脂质过氧化物(LPO)、ROS含量显著升高(P<0.05).普鲁士蓝染色显示,对照组相比,AAⅠ中、高剂量组小鼠肝脏铁沉积显著增加(P<0.05);小鼠肝脏铁代谢相关二价金属转运蛋白1(DMT1)、转铁蛋白受体(TFRC)表达量显著上调(P<0.05),铁蛋白重链 1(FTH1)基因和蛋白表达量显著下调(P<0.05);铁死亡相关谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)、胱氨酸谷氨酸转运体(xCT)基因和蛋白表达量显著下调(P<0.05),环氧合酶-2(COX2)、血红素氧合酶-1(HO-1)基因和蛋白表达量显著上调(P<0.05);线粒体出现体积缩小、嵴减少或消失等典型铁死亡特征;小鼠肝组织中白细胞介素-6(IL-6)表达量、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、IL-1β含量均显著升高(P<0.05),核因子 κB(NF-κB)通路激活.体外试验结果显示,与空白对照组相比,AAⅠ可显著抑制AML12细胞活力(P<0.05),中、高剂量AAⅠ可显著升高AML12细胞ROS水平,降低线粒体膜电位,下调GPX4,上调COX2(P<0.05);Fer-1可显著逆转上述损伤.[结论]AAⅠ可诱导明显肝毒性,其机制与铁死亡密切相关.AAⅠ通过扰乱铁代谢引发铁过载、加剧氧化应激,并激活NF-κB通路诱发炎症;铁死亡、氧化应激与炎症协同作用,共同介导AAⅠ诱导的肝损伤.

[目的]旨在研究马铃薯蛋白粉等氮替代鱼粉对断奶仔猪生长性能、养分消化率及血清抗氧化指标的影响,以评估其在断奶仔猪饲粮中应用的可行性.[方法]选取 29日龄、体重相近(6.98 kg±0.11 kg)的健康断奶仔猪60头,随机分为2组,每组6个重复,每个重复5头猪.对照组仔猪饲喂基础饲粮,试验组仔猪饲喂2％马铃薯蛋白粉等氮替代鱼粉的基础饲粮,试验期15 d.于试验第15天以栏为单位对仔猪空腹称重,按重复记录每天采食量,计算生长性能;每天记录每栏仔猪的腹泻头数,计算腹泻率;分别于试验结束前3 d采取每栏的新鲜粪便,混合后用硫酸处理后测定养分消化率;于第12天前腔静脉采血,分离血清,测定其抗氧化指标.[结果]与对照组相比,试验组断奶仔猪终末体重提高2.89％、平均日增重提高6.23％、平均日采食量提高3.93％,料重比降低了2.52％,但均无显著差异(P>0.05).试验组断奶仔猪的腹泻率和死亡率与对照组相比无显著差异(P>0.05).与对照组相比,试验组断奶仔猪的干物质表观消化率显著降低(P<0.05),其余养分消化率指标均无显著差异(P>0.05).血清抗氧化指标方面,与对照组相比,试验组断奶仔猪血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性升高,丙二醛(MDA)含量降低,但均无显著差异(P>0.05).[结论]在本试验条件下,在断奶仔猪饲粮中使用2％马铃薯蛋白粉等氮替代鱼粉,未对生长性能、营养物质消化率和机体抗氧化能力产生负面影响,但干物质表观消化率显著降低,其影响需予以关注.该替代方案具有一定应用潜力,但其可行性需结合消化率指标进行综合评估.

[目的]研究富马酸卢帕他定与阿莫西林联合用药对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的体外抗菌效果,为老药新用、抗菌药物联合用药及抗菌靶点提供新思路.[方法]采用微量肉汤稀释法测定富马酸卢帕他定与阿莫西林单药对MRSA ATCC 33591的最小抑菌浓度;通过药敏纸片扩散法检测两种药物对MRSA ATCC 33591的抑菌圈;运用棋盘法测定两种药物的联合抑菌浓度指数(FICI)并判断联合效应;设置对照组、富马酸卢帕他定单药组、阿莫西林单药组,以及两种药物的联用组,作用于 MRSA ATCC 33591,绘制细菌生长曲线与时间杀菌曲线;通过结晶紫染色法检测药物对MRSA生物膜形成的抑制作用;利用碘化丙啶染色结合荧光检测分析细菌膜完整性.同时,通过分子对接技术预处理 PBP2a蛋白(PDB ID:1 MWT、1MWU)及富马酸卢帕他定配体,采用 AutoDock Vina 1.2.3软件完成分子对接,结合PyMOL 2.5可视化及PLIP在线工具分析结合模式.[结果]富马酸卢帕他定和阿莫西林对MRSA ATCC 33591的最小抑菌浓度分别为64和32 μg/mL;纸片扩散法结果显示,两种药物的抑菌圈直径分别为10.4和10.6 mm,纸片间可见协同抑菌趋势;二者联合作用呈协同效应,FICI为0.5.细菌生长曲线显示,联合用药后24 h细菌浓度明显低于单独使用任一药组;生物膜形成抑制试验和细菌膜完整性试验进一步表明,与单独用药相比,联合用药可显著降低细菌生物膜含量,且对细菌细胞膜完整性的破坏作用显著高于单独用药(P<0.05);富马酸卢帕他定可能靶向结合MRSA耐药关键蛋白PBP2a的活性口袋,干扰其与β-内酰胺类抗生素的结合位点并抑制PBP2a功能.[结论]富马酸卢帕他定与阿莫西林联合用药能增强对MRSA的抑菌效果,具有潜在的抗菌应用价值,本研究为富马酸卢帕他定与阿莫西林联合抗菌提供了科学依据.

目的:本研究旨在探究组蛋白 H3K9 甲基转移酶 G9a 在斑马鱼咽齿从发生到早期形态建成关键阶段的时空表达模式.方法:以野生型 AB 系斑马鱼为模型,收集 36～84 hpf 的胚胎.通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)克隆斑马鱼咽齿特异性标记基因配对样同源域 2(paired-like homeodomain 2,pitx2)、远端缺失同源盒基因 2b(distal-less homeobox 2b,dlx2b)及 G9a 基因编码区片段,制备地高辛标记的反义 RNA 探针.采用整体原位杂交(whole-mount in situ hybridization,WISH)技术系统检测 G9a 在咽齿发育区域的动态表达,并与 pitx2 和 dlx2b 的表达模式进行共定位比较.结果:RT-PCR 成功克隆得到目的基因片段.原位杂交结果显示,在 36～48 hpf,G9a 在咽部区域呈现广泛表达.至 56～60 hpf,咽齿牙胚开始特化,pitx2与 dlx2b 在特定区域呈现强阳性信号,此时 G9a 的表达区域与 pitx2、dlx2b 的表达区域高度重叠.在 72～84 hpf 的形态发生阶段,G9a 在持续发育的咽齿原基中保持显著表达.结论:本研究揭示了 G9a 在斑马鱼咽齿发育关键时期具有特定的时空表达模式,其表达区域与已知的咽齿标记基因高度一致,提示 G9a 可能通过表观遗传调控机制参与斑马鱼咽齿的形态发生过程.

试验旨在探讨马齿苋水提物制备最佳工艺,并对其理化指标和活性成分进行分析.以单因素试验结合响应面优化法,考察料液比、超声温度、超声时间及超声功率4个关键参数,确定马齿苋水提物最佳提取工艺,对马齿苋水提物进行理化特征检测,并通过高效液相色谱技术对其进行成分分析.结果表明:马齿苋水提物的最佳提取工艺为超声功率560 W,料液比1∶35(g/mL),超声温度62℃,超声时间82 min.在此最佳条件下,马齿苋水提物得率为21.19%、总黄酮含量为89.13 mg/g、总酚含量为12.30 mg/g,综合评分为51.149分,与模型预测值51.073分接近,相对误差为0.15%.制备的马齿苋水提物含有水分(3.826±1.698)g/100 g、多糖(9.418±1.195)mg/g、蛋白质(287.140±5.834)mg/g、总酸(1.512±0.095)mg/g.不同温度与pH下测得马齿苋水提物的水溶性、持水力、持油力、乳化性与乳化稳定性在常温与强酸条件下结果较好.高效液相结果显示,马齿苋水提物共分析出6种酚酸类物质和1种黄酮类物质,其中咖啡酸含量最高.

针对编码马疱疹病毒 1 型(Equine Herpesvirus Type 1,EHV-1)包膜糖蛋白 gB ORF33 基因的保守序列,利用 Primer 5.0 软件设计特异性引物,构建 pMD19-T-ORF33 重组质粒作为标准品,将重组酶聚合酶等温扩增(Recombinase-Polymerase Amplification,RPA)技术与侧流层析试纸(Lateral FlowDipstick,LFD)相结合,建立EHV-1 的 RPA-LFD 现场诊断方法并优化其反应条件,评估其灵敏性、特异性和临床应用的可靠性.结果显示,所建方法对 EHV-1 最低检测限为 6.023×101 拷贝/μL,比传统 PCR 方法灵敏度高 100 倍;对阿卡斑病毒、链球菌、巴氏杆菌和大肠杆菌均未出现非特异性扩增;在 37℃条件下反应 20min 可获得最佳检测效果,常温条件下也能完成检测.对 15 份临床样本进行验证性检测,结果与 PCR 方法完全一致,说明本试验所建立的 RPA-LFD 诊断方法灵敏性强、特异性高,且快速便捷,可为 EHV-1 的现场诊断提供技术支撑.

[背景]马肠链球菌(Streptococcus equinus)为 D 群链球菌中的一种机会性致病菌,也是人兽共患病病原,分析其基因组特征和潜在致病性,可为该菌引发感染的防控提供参考.[目的]从牛乳源分离纯化得到 2 株马肠链球菌,对分离株进行全基因组测序,了解其基因组的基本特征,明确该菌的分子进化规律.[方法]获得的 2 株马肠链球菌菌株分别命名为 XJNL131 和XJNL132,并对其进行生长曲线、生物膜形成、药物敏感性和对小鼠毒力的检测和比较.利用二代测序技术对分离菌株进行全基因组测序和基因序列分型,采用测序数据与数据库中已有序列构建基因组进化树及多位点序列分型(multiple locus sequence type,MLST)进化树,利用毒力因子数据库(virulence factor database,VFDB)和综合抗性基因数据库(comprehensive antibiotic resistance database,CARD)数据库对 2 株菌的毒力基因和耐药基因进行注释和比较.[结果]菌株 XJNL131 和菌株XJNL132 基因组大小分别为 1 869 751 bp 和 1 878 769 bp,分别有 1 766 与 1 781 个编码区,菌株XJNL131 携带有 216 个毒力基因,菌株 XJNL132 携带有 217 个毒力基因;菌株 XJNL131 共有257 个耐药基因,菌株 XJNL132 共有 258 个耐药基因.菌株 XJNL131、菌株 XJNL132 的基因型均为新发现基因型 ST240.基因组进化树显示菌株 XJNL131、菌株 XJNL132 与牛源 Streptococcus equinus(JB1,ATCC 33317,NM-7,CNU 77-23)、人源 Streptococcus equinus 菌株(MGYG-HGU-0313,NCTC8133)、牛源瘤胃链球菌(Streptococcus ruminicola)CNU-G2 和人源瘤胃链球菌(Streptococcus ruminicola)CNU_77-47 亲缘关系最近.MLST 系统进化树显示菌株 XJNL131、XJNL132(ST240)与人源(ST62)、鹿源(ST33)马肠链球菌分离株亲缘关系较近.菌株 XJNL131 对 4 种抗生素耐药,菌株 XJNL132 对 1 种抗生素耐药.结晶紫法检测表明,菌株 XJNL131 生物膜形成能力显著高于菌株 XJNL132(P<0.05);菌体载量结果表明,2 株菌对脾脏的侵袭力明显高于肝脏.而菌株XJNL131 的小鼠脾组织荷菌量极显著高于菌株 XJNL132(P<0.01),并且对小鼠脾脏病理损伤更严重.[结论]本研究分离出 2 株牛乳源马肠链球菌 XJNL131 和 XJNL132,均为新基因型 ST240,其中菌株 XJNL132 携带毒力和耐药基因多,致病表型更强;菌株 XJNL131 生物膜形成能力强,耐药表型显著.研究结果为牛源马肠链球菌的疾病防治、流行与公共卫生提供参考资料.

随着我国科学技术的不断发展与进步,养殖业也迎来了新的发展机遇.通过采取更加科学的饲养管理方式,可为行业发展带来更加可观的经济效益和社会效益.巴马香猪是少数民族地区珍贵的微型地方猪种,提升其养殖生产性能有利于进一步提高养殖质量与效益.本文以广西河池地区的巴马香猪养殖为例,阐述了该地区巴马香猪的养殖现状及生产性能提升策略,以期为当地生态养殖开辟新途径,促进区域经济全面增长.

基于代谢组学研究绞股蓝提取物(Gynostemma pentaphyllum extract,GPE)对巴马香猪肠道代谢的调控作用.选取30～35日龄的巴马香猪仔猪50头,随机分为空白对照组、GPE低剂量组、GPE中剂量组、GPE高剂量组.空白对照组饲喂基础日粮,GPE低剂量组、中剂量组、高剂量组分别在日粮中添加0.4%、0.8%和1.6%的GPE,试验期为28 d.结果显示,日粮添加GPE可显著改变仔猪肠道的代谢物谱(P≤0.05);差异代谢物分析显示,高剂量GPE可上调有机酸衍生物、脂质类及有机氮化合物含量,下调N-乙酰-D-半乳糖胺、DL-脯氨酸含量;KEGG通路分析显示,与空白对照组相比,GPE可显著调控仔猪脂质代谢、氨基酸代谢、核苷酸代谢、辅因子与维生素代谢等通路(P≤0.05),以中剂量组、高剂量组效果最为显著;Pearson关联分析显示,番茄碱、乙酰胆碱等代谢物与拟杆菌门、乳杆菌属等有益菌呈显著正相关,硬脂酸与疣微菌门、瘤胃球菌科UCG-002呈显著负相关;上述有益菌群可上调SOD、GSH-Px等抗氧化指标与紧密连接蛋白表达,抑制IL-1β、TNF-α等促炎基因与MDA积累(P≤0.05).综上所述,日粮添加GPE可通过调控肠道菌群-代谢物互作,优化多条关键代谢通路、提升抗氧化功能、减轻肠道炎症、维护肠道屏障完整性,进而改善巴马香猪仔猪肠道健康,中、高添加剂量应用效果较好.

鸡马立克氏病与鸡传染性贫血病均为危害养禽业的重要免疫抑制性疾病.二者混合感染不仅增加诊断难度,更可引发严重的免疫抑制和疫苗免疫失败.本文以河北省沧州市某规模化鸡场一起疑发肿瘤性疾病为例,通过临床剖检、组织病理学及分子生物学检测等多种检测结果,结果显示病鸡内脏器官存在多发性肿瘤结节,胸腺萎缩;主要脏器中鸡马立克氏病病毒(MDV)与鸡传染性贫血病毒(CIAV)核酸qPCR检测均为阳性,最终确诊为MDV与CIAV混合感染.本研究结果提示,该鸡群的肿瘤发生、免疫失败可能与CIAV诱导的协同感染有关,为该地区鸡群免疫抑制病的鉴别诊断与综合防控提供了参考依据.