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盲肠肝炎又称黑头病,是由火鸡组织滴虫感染引起的一种严重危害禽类的寄生虫病.该病以肝脏坏死性病变和盲肠溃疡性炎症为特征,临床表现为腹泻、消瘦、头部发绀等症状,雏鸡、青年鸡致死率可达 50%～100%,成年鸡感染后虽死亡率较低,但会导致生长迟缓、产蛋率下降 20%～30%,给养殖业造成重大经济损失.本文系统阐述鸡盲肠肝炎的流行病学、临床症状及诊断要点,提出加强环境管理、提高鸡群免疫力,定期进行驱虫及药物治疗等防控措施,以期为散养鸡产业的健康发展提供技术支撑.
散养鸡盲肠肝炎诊断技术综合防治
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林下养鸡模式近年来在某些山区得到快速发展,但开放式饲养环境增加了鸡群感染组织滴虫病的风险.该病由火鸡组织滴虫引起,主要损害盲肠与肝脏,典型症状包括头部发绀、硫磺色粪便与肝脏坏死,该病传播速度快、感染率高,一旦暴发往往造成严重经济损失.本文结合生产实践,系统梳理组织滴虫病流行病学、临床症状及剖检变化,探讨了诊断技术与综合防控策略,以期为提升养殖户疾病防控能力,保障禽类健康与食品安全提供理论依据与技术支持.
鸡组织滴虫病诊断治疗预防
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为了解黑龙江省3个鸵鸟养殖场分离鉴定的112株鸵鸟源大肠杆菌对氟喹诺酮药物的耐药机制,采用纸片扩散法(K-B)对大肠杆菌进行耐药表型的检测,采用聚合酶链式反应(PCR)对喹诺酮耐药决定区(QRDR)和质粒介导喹诺酮耐药基因(PMQR)等10种耐药基因进行检测,并分析耐药谱较广的菌株突变位点.结果表明:112株大肠杆菌对环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星耐药率分别为46.43%、26.79%、23.21%.gyrA、gyrB、parC、parE检出率分别为13.39%、39.29%、16.07%、72.32%.PMQR检出耐药基因有qnrA、qnrS、oqxB基因,检出率分别为12.50%、79.46%、8.04%.QRDR氨基酸突变位点分析发现:gyrA基因存在Pro101→Leu、Ser66→Tyr突变;gyrB存在Ile112→Thr、Ala173→Val等突变;parC突变位点为Gly165→Ser,parE突变位点为Ala101→Val等.说明112株鸵鸟源大肠杆菌耐药表型检测结果与耐药基因检测结果一致.
氟喹诺酮类药大肠杆菌耐药性
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规模化家禽养殖场疫病种类多、传播速度快,混合感染与免疫干扰现象频发,给防疫工作带来严峻挑战.活载体疫苗依托病毒载体稳定表达外源保护性抗原,可实现多病联合免疫,在提高免疫效率、简化免疫程序等方面具有明显优势.当前以禽痘病毒、火鸡疱疹病毒、新城疫病毒为代表的家禽活载体疫苗研究不断深入,部分产品已实现产业化应用.本文围绕上述三类主流家禽活载体疫苗的生物学基础、构建特点及国内外研究现状展开综述,以期为新型疫苗研发与临床科学应用提供理论参考.
家禽活载体疫苗禽痘病毒火鸡疱疹病毒新城疫病毒
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为探究火鸡组织滴虫的致弱分子机制,通过动物试验结合转录组测序技术对火鸡组织滴虫致弱虫株(JSYZ-D168)与强毒虫株(JSYZ-D10)进行比较分析.结果显示,D168虫株致病性显著降低且对鸡群具有一定的免疫保护效果.D10 vs D168共获得1 160个差异基因,其中188个在D10中上调表达,972个下调表达.差异基因GO富集分析显示,差异基因显著富集于染色体、组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶活性、血糖稳态、细胞间黏附和膜的组成部分.KEGG富集分析显示,差异基因显著富集在NOD样受体信号通路、TRP通道的炎症介质调节和Toll及Imd信号通路中.从转录组中随机选择8个差异基因进行qRT-PCR验证,验证结果与转录组分析结果趋势一致,证明转录组测序数据准确可靠.综上,本研究为火鸡组织滴虫弱毒活疫苗的研发提供了理论依据.
火鸡组织滴虫致弱转录组测序差异表达基因
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鸵鸟是一种以植物为主的杂食动物,同时,它是一种具有生长速度快、饲料转化效率高、适应性强和经济效益高等优势的特种畜禽.这些优点均依赖于其发达的肠道,而肠道不仅是重要的消化器官,同样也是第一大免疫器官.维持肠道结构完整、功能健全和菌群稳定是保证动物健康的关键性因素.鉴于这些特点,该文对鸵鸟肠道形态结构、各肠段菌群分布情况及其影响因素和改善方法进行综述,以期通过菌群改善促进鸵鸟肠道健康,为鸵鸟肠道健康管理、提高养殖水平提供理论依据.
鸵鸟肠道结构肠道菌群益生菌特种畜禽杂食动物
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为建立一种特异性强、灵敏度高且简便快捷的象亲内皮疱疹病毒(EEHV)检测方法,以高度保守的EEHV gB基因为靶标,设计用于重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)的高特异性引物,通过引物组筛选、反应温度优化、检测限确认等,建立EEHV的RPA检测方法,并评估其灵敏度、特异性、重复性以及临床样品检测性能.结果显示:建立的RPA方法的检测时长约为34 min,最佳反应温度为39 ℃;与人源单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1、HSV-2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、鼠源疱疹病毒(MHV)、火鸡疱疹病毒(HVT)、禽马立克病毒(MDV)均无交叉反应;最低检出限为2×10-1 copies/μL,组内与组间重复性试验的扩增条带稳定性良好,未见明显差异.采用该方法对26份临床样品(经qPCR检测阳性率为26.9％)进行检测,结果阳性检出率为23.1％(6/26),高于传统PCR(15.4％,4/26).结果表明,本研究成功建立了特异性强、灵敏度高、重复性好的EEHVRPA检测方法,为EEHV感染的快速检测提供了技术支撑.
象亲内皮疱疹病毒RPAgB基因快速检测
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鸡组织滴虫病又称盲肠肝炎或黑头病,是由火鸡组织滴虫引起的一种严重危害家禽健康的原虫病.该病主要侵害鸡的盲肠和肝脏,临床表现为精神沉郁、排硫磺色粪便、肝脏和盲肠出现特征性病变.近年来随着散养鸡模式的推广,该病在我国多地呈现散发或地方性流行趋势,给养殖业造成较大经济损失.为有效防控该病,从病原学特性、流行病学特点、临床症状、病理剖检变化等方面阐述了鸡组织滴虫病的诊断要点,并结合生产实践提出包括改善饲养环境、控制传播媒介、药物治疗及综合防控等措施,旨在为养殖场科学防控该病提供技术参考,降低发病率和死亡率,保障养鸡业健康稳定发展.
鸡组织滴虫病临床诊断病理变化综合防治
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H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)是我国乃至全球流行最广的低致病性禽流感病毒(Low pathogenicity avian influenza virus,LPAIV),主要引起禽类呼吸道感染,不仅严重危害家禽养殖业生产安全,也对人类健康构成潜在威胁.该病毒易与其他病原体发生混合或继发感染,引起支气管栓塞,加重临床症状,导致死淘率升高,造成巨大经济损失.我国针对H9N2亚型禽流感已应用灭活疫苗产品近30年,免疫后可缓解临床症状,大大减少经济损失.尽管该类疫苗产品在SPF鸡的实验室回归试验中展现出优异保护效果,但在实际生产场景中,H9N2 AIV抗原漂移形成的复杂抗原群导致与疫苗株的匹配度降低,且难以完全阻断病毒排毒,制约现有灭活疫苗的防控效果,给该病的防控工作带来极大挑战.随着我国自主研发实力的提升,近年来获得临床试验批件的火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)载体活疫苗有望助力解决目前H9N2亚型禽流感的防控痛点.因此,文章对我国H9N2 AIV的流行趋势与防控策略进行综述,重点总结其流行演化特征及防控实践中的关键挑战,以期为完善H9N2亚型禽流感的综合防控体系及相关防控策略的科学制定提供参考依据.
H9N2禽流感支气管栓塞HVT载体活疫苗
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H9N2亚型禽流感病毒Y280谱系新型变异株的出现,对养禽业构成新的威胁,现有的商品化疫苗难以提供完全保护.旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以火鸡疱疹病毒(HVT)为载体,构建表达H9N2 Y280分离株血凝素(HA)蛋白的重组病毒.首先,设计并合成靶向HVT基因组US2非必需区的gRNA,同时构建CRISPR/Cas9表达质粒及携带红色荧光蛋白(RFP)和HA基因的供体质粒.将上述重组质粒共转染鸡胚成纤维细胞,经嘌呤霉素加压筛选后,再接种HVT.待出现表达RFP的病毒蚀斑后,通过连续3轮蚀斑纯化,获得表达HA蛋白的重组病毒HVT-RFP-HA.随后,利用Cre-lox系统切除RFP标记基因,再经3轮无荧光蚀斑纯化,最终获得无筛选标记的重组病毒HVT-HA.通过PCR和测序对外源基因插入位点进行鉴定,并将重组病毒连续传代20次以评估其遗传稳定性.结果表明,HA基因已准确插入HVT基因组的US2位点;连续传代20次后,HA基因仍稳定保留.本研究成功建立了基于NHEJ-CRISPR/Cas9与Cre-lox系统的重组HVT载体疫苗快速构建平台,所获重组病毒HVT-HA遗传稳定性良好,为H9N2 Y280谱系变异株的防控提供了候选疫苗株,但其免疫保护效果尚需进一步验证.
H9N2HA基因NHEJ-CRISPR/Cas9HVT-HA
