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猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的一种急性、高度接触性病毒性传染病,属于养猪业中需要重点防控的二类动物疫病.仔猪感染后病死率很高,成年猪大多表现为隐性感染,容易引发母猪繁殖障碍、育肥猪呼吸道疾病等问题.结合规模化猪场实际生产情况,梳理伪狂犬病的病原与流行特点,从临床症状、病理剖检、实验室检测等角度整理该病的诊断手段,结合生产实践总结疫苗免疫、生物安全管理、猪场净化以及日常饲养管理等防控对策,以期减少该病发生,降低猪场养殖损失.
猪伪狂犬病伪狂犬病毒临床诊断防控措施
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本研究旨在评价犬狂犬病疫苗免疫抗体合格率及影响因素.检索数据库中横断面及回顾性研究,共纳入15篇文献、8个影响因素,使用Meta分析评价抗体合格率及影响因素.免疫次数显著影响抗体合格率(OR=2.23,P＜0.001),且与抗体合格率显著正相关(r=0.431,P=0.035).免疫年龄(OR=1.98,P＜0.001)、饲养模式(OR=2.21,P＜0.001)、采样时间(OR=1.42,P=0.004)也是显著影响因素.进口或国产疫苗(OR=1.02)、犬饲养环境(OR=1.19)、犬体型(OR:1.11)、犬性别(OR=1.08)对抗体合格率无显著影响(P＞0.05).Meta分析结果显示,纳入研究的合并抗体合格率为76.00％.综上,建议首次免疫后1个月加强免疫以后每年免疫1次,加强对犬集中场所犬只疫苗免疫,接种后2-6个月监测抗体.
狂犬病影响因素抗体合格率Meta分析犬
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[目的]试验以重组酶聚合酶扩增(RPA)以及CRISPR/Cas12a反式剪切技术为基础,建立一种特异性好、灵敏度高的猪圆环病毒3型(PCV3)快速检测方法.[方法]针对PCV3 Cap基因保守片段设计5条crRNA序列和2对 RPA 引物,通过筛选最佳 crRNA-RPA 组合、Cas12a与 crRNA 浓度比以及 ssDNA 荧光报告探针浓度,建立PCV3的RPA-CRISPR/Cas12a快速检测方法,并进行特异性、灵敏度、重复性试验及临床样品检测.[结果]经过筛选确认最佳作用组合为:crRNA-RPA组合为crRNA2-RPAF1/R1,Cas12a与crRNA浓度比为4:1,ssDNA荧光探针浓度为400 nmol/L.据此建立的RPA-CRISPR/Cas12a方法仅能检测出PCV3,不能检测出猪圆环病毒2型(PCV2)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)及猪伪狂犬病病毒(PRV),特异性好;最低检测限为1 拷贝/μL,灵敏度强.重复性试验结果显示,组内和组间变异系数均<5％,重复性良好.应用本研究建立的方法检测103份临床组织样品,结果显示,其与实时荧光定量 PCR 检测结果的符合率达 100％.[结论]本研究成功建立了一种 PCV3 RPA-CRISPR/Cas12a检测方法,该方法特异性好、灵敏度强、准确率高,可作为现场快速检测PCV3的有效方法.
猪圆环病毒3型(PCV3)重组酶聚合酶扩增(RPA)CRISPR/Cas12a系统快速检测
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规模化猪场呼吸道疾病传播速度快、发病率高,猪只容易出现混合感染,进一步加大防治难度.猪群患病后会影响生长发育、降低饲料转化率、增加死亡率,造成较大经济损失.本文结合规模化猪场养殖实际,分析猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪传染性胸膜肺炎三种常见呼吸道疾病的流行特点、临床症状及发病原因,从环境管理、饲养管理、生物安全管理、规范免疫接种等方面提出具体综合防控措施,以期为规模化猪场有效防控呼吸道疾病提供借鉴参考,促进养殖效益提升.
规模化猪场呼吸道疾病综合防控免疫接种
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本研究针对大连市规模种猪场伪狂犬病(PR)流行现状,通过系统调查、技术创新与示范推广,建立了"本底调查—免疫控制—监测淘汰—生物安全强化"的净化技术体系.本研究检测 26 家种猪场的 829 份血清样本,结果显示,gE抗体平均阳性率为 36.8％,gB 抗体阳性率为 77.6％.基于此,本研究制定差异化净化策略,研发 7 项专利设备以提升监测效率,并在4家示范场验证方案的可行性.结果显示,9家种猪场gE抗体阳性率降至0,技术推广应用于18.33万头能繁母猪,新增纯收益 7679.35 万元.该技术为生猪疫病净化提供了科学路径,显著提升了产业效益.
伪狂犬病净化规模种猪场技术规范gE/gB抗体生物安全
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探讨螺旋藻多糖组分1(Arthrospira platensis polysaccharide,PAP-1)对猪伪狂犬病病毒(PRV)感染RAW264.7细胞诱导的组蛋白乙酰化及炎症反应的影响.基于PRV感染RAW264.7细胞模型,检测PAP-1处理后炎症基因的mRNA表达水平及组蛋白乙酰化修饰变化.结果显示,与细胞对照组相比,PRV处理极显著上调IL-17A、CXCL10的mRNA表达(P＜0.01),显著或极显著上调HAT1、H3K14ac、H3K18ac的蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01);与PRV组相比,PAP-1处理极显著下调IL-17A、CXCL10的mRNA表达水平及 HAT1、H3K14ac、H3K18ac的蛋白表达水平(P＜0.01),同时极显著上调IL-10的mRNA表达水平与HDAC2的蛋白表达水平(P＜0.01).结果表明,PRV感染可通过升高组蛋白乙酰化修饰增强炎症反应,PAP-1可能通过下调组蛋白乙酰化水平发挥抗炎作用,可能是潜在的组蛋白乙酰转移酶抑制剂.
螺旋藻多糖伪狂犬病毒炎症组蛋白乙酰化组蛋白乙酰转移酶抑制剂
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猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的伪狂犬病对全球养猪业带来了重大经济损失.不同形态PRV病毒粒子的纯化与鉴定,对于进一步研究PRV的病原结构、免疫机制和疫苗研发具有重要意义.本研究对PRV Bartha-K61经典毒株的半数组织细胞感染剂量(TCID50)和一步生长曲线进行了测定,结果表明以0.1 MOI的病毒感染细胞24 h～30 h收毒最佳,收毒后反复冻融三次并以5 000 r/min离心30 min去除细胞碎片,再过30％蔗糖垫后进行30％～55％的蔗糖梯度纯化获得三条不同形态病毒粒子带,透射电镜观察病毒粒子结构存在显著差异.通过间接免疫荧光实验发现三种形态病毒粒子均有感染性,SDS-PAGE分析发现三条带中的蛋白组成亦有所不同,以三条带为模板进行PCR扩增gE基因,均成功获得目的条带.本研究通过蔗糖密度梯度法纯化到不同形态的PRV病毒粒子,为进一步进行PRV抗原结构解析和疫苗的研发奠定基础.
伪狂犬病毒纯化蔗糖梯度鉴定
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犬乳腺肿瘤是家养犬及工作犬高发肿瘤类疾病,临床统计该病占犬肿瘤性疾病总病例的50％,其中恶性病例占比超半数,存在复发率高、远处转移风险大的特点,严重损害患犬生存质量与生命周期.本文依托新疆出入境边防检查总站乌鲁木齐警犬训练基地两例临床病例研究数据,系统梳理犬乳腺肿瘤良恶性病理特征、分层诊断体系、阶梯式治疗方案,同时剖析该病发病相关影响因素,为临床防控与诊疗提供理论参考.
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犬心丝虫病是由犬恶丝虫引起的一种蠕虫病,经库蚊等叮咬传播,呈世界性分布.该病特征是进行性、不可逆的心功能不全和心肺问题的进行性表现,初期常呈亚临床状态,随病程进展出现咳嗽、运动不耐受、呼吸困难,最终发展为右心衰竭或腔静脉综合征而死亡.
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[目的]探究猪伪狂犬病病毒与细胞衰老的关系,分析细胞衰老微环境对病毒复制的调控作用,为理解细胞衰老在病毒感染进程中的功能提供参考.[方法]在猪伪狂犬病病毒感染猪肾上皮细胞PK-15后,通过β-半乳糖苷酶染色、Western blot、荧光定量PCR及流式细胞术分别检测衰老标志物及活性氧水平;利用多柔比星构建稳定的细胞衰老模型,评估该状态对猪伪狂犬病病毒复制的影响.[结果]猪伪狂犬病病毒感染PK-15细胞后出现衰老相关指标的上调,为典型的病毒诱导的细胞衰老.通过多柔比星构建稳定的衰老细胞,然后感染猪伪狂犬病病毒,结果发现衰老微环境显著抑制猪伪狂犬病病毒复制,具体表现为病毒糖蛋白gE与gB的mRNA及蛋白表达下调、子代病毒产量减少,以及病毒基因组拷贝数降低.进一步分析发现,衰老细胞中多种衰老相关分泌表型因子,包括IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-8的表达显著上调;将衰老条件培养基作用于正常细胞后,同样可抑制猪伪狂犬病病毒复制,表明衰老相关分泌表型可通过旁分泌方式介导抗病毒效应.[结论]猪伪狂犬病病毒感染可诱导PK-15细胞发生典型病毒诱导的细胞衰老,衰老微环境通过上调衰老相关分泌表型因子,并以旁分泌方式抑制猪伪狂犬病病毒复制,表明细胞衰老是宿主内在的抗病毒防御机制.
伪狂犬病病毒病毒诱导细胞衰老衰老相关分泌表型抗病毒机制
