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番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)传播速度快、寄主范围广,亟需建立适用于口岸、温室和田间等现场场景的快速检测方法.本研究旨在建立一种灵敏、特异、快速且便于现场应用的 TSWV 检测技术,为该病毒的早期诊断和精准监测提供技术支撑.研究以 TSWV L基因保守区为靶标,设计多组 MIRA 引物和探针,并结合正交-反交矩阵筛选确定最优引物-探针组合,构建 25 μL 多酶恒温快速扩增(multiple isothermal rapid amplification,MIRA)体系.该检测方法在 37℃恒温 20 min 下即可检出 1.984×10-4 ng/μL 的病毒 RNA,灵敏度比 RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)提升约 100 倍,且与番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV)、番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)等 5 种相关病毒无交叉反应,表现出较高的特异性.该方法操作简便、反应迅速,全程无需大型精密仪器,可满足 TSWV 现场快速筛查需求,为种子调运检疫、疫情早期处置以及低成本精准监测提供技术支撑.
番茄斑萎病毒多酶恒温快速扩增技术现场检测种子检疫快速诊断
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随着城市园林绿化事业的快速发展,病虫害防控已成为园林养护管理的核心环节.本研究梳理了大庆地区园林植物常见病虫害的种类及危害特征,病害主要包括白粉病、炭疽病、软腐病、锈病等;虫害主要包括蚜虫、刺蛾、尺蛾、天牛、木蠹蛾等.针对上述病虫害,提出了以选用抗性品种、开展科学养护管理、落实植物检疫为核心的农业防治措施,构建以利用天敌生物、施用微生物农药与植物源农药为主体的生物防治技术体系,形成适配大庆地区气候特点和园林生态系统特征的病虫害生态防控技术模式,以期为实现园林植物病虫害的绿色可持续治理提供技术参考.
大庆地区园林植物病虫害生态防控
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为明确西藏色季拉山急尖长苞冷杉(Abies georgei Orr var.smithii)心腐病病原菌种类及其发生规律,奠定心腐病科学防控的理论基础.以 10 份急尖长苞冷杉典型病株的心材为材料,采用 PDA-愈创木酚和 PDA-苯胺蓝双重平板培养基,从病健交界处分离可降解纤维素与木质素的病原真菌,经 ITS 序列初步鉴定后,使用柯赫法则验证.检测病原菌的最适生长温度、pH、碳源、氮源、光照条件等生物学特性.结果表明:共分离获得两株急尖长苞冷杉心腐病病原菌,分别命名为菌株 AF-10 及菌株 AF-16,经初步鉴定,菌株 AF-10 为小孢黑管孔菌(Bjer-kandera minispora)、菌株 AF-16 为变色栓菌(Trametes versicolor).菌株 AF-10 最适生长温度为 20℃、最适 pH 为8、最佳碳源为麦芽糖、最佳氮源为牛肉膏;菌株AF-16 最适培养条件为28℃、最适pH 为6、最佳碳源为葡萄糖、最佳氮源为酵母浸膏.两株菌均偏好黑暗环境生长.
急尖长苞冷杉心腐病病原真菌木质素降解生物学特性
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为展示国家重点研发计划"外来病虫害高效检测关键技术与装备研发"(2021YFD1400100)在外来病虫害分子检测领域的成果,推动该领域技术规范化应用与升级,本文围绕项目研发的精准、多重、一次性分子检测技术,系统总结了项目在分子检测技术突破、配套产品研发、标准规范制定及示范应用等方面的核心成果,分析了成果应用面临的问题与挑战,展望了后续研发与推广方向.研究突破了高特异性靶标筛选、多重检测抗干扰等核心技术瓶颈,形成了"检测技术+配套产品+标准规范"的完整成果体系,显著提升了我国外来病虫害分子检测的精准度、效率和便捷性,为我国农业生物安全防控提供了有力技术支撑,为相关领域研究与应用提供参考.
植物外来病虫害精准检测多重检测一次性检测
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汝州市地处河南省中西部,具有"北依嵩岳、南枕伏牛、西望洛邑、东瞰黄淮"的独特地理格局.北汝河自西向东贯穿全境,辖区内公路纵横交织,交通网发达,人员来往密集.多样化的地形为不同类型的生物提供了栖息环境,同时增加了外来物种入侵的生态风险.
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美国白蛾(Hyphantria cunea)作为一种源自北美洲的昆虫,已被列为国际性检疫性有害生物,自从 1979年首次在中国被发现以来,已扩散至多个省份,对经济林果树、园林植物及其他农作物等农林业生态系统造成了严重破坏.本文系统梳理了美国白蛾的形态特征、危害特点及发生规律等,有针对性地提出了"预防为主、科学防控"的综合防治体系,通过检疫预防、物理诱捕、生物控制、化学防治等多种手段,为美国白蛾的可持续控制提供技术参考.
美国白蛾发生危害综合防控
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猩猩被IUCN列为极危,圈养种群在迁地保护与公众教育中作用上升.国内动物园受物候、检疫与采购限制,日粮以栽培果蔬为主,可溶性糖偏高而中性洗涤纤维不足,肥胖、龋齿和反刍呕吐较常见.本文依据人科动物营养需要与野外食性结构,提出植物性饲料替代的营养等效、功能等效、多样性与安全性原则,并分别讨论果实、叶菜、茎根、花朵为圈养猩猩日粮优化提供参考.
猩猩圈养饲养植物性饲料替代策略
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[目的]粮食安全是世界性的重大课题,进境粮食中携带的植物检疫性病原物一旦传入我国,极有可能对国内农业生产、粮食安全及生态环境等造成严重影响.大豆[Glycine max(L.)Merr.]是我国重要的进口粮食作物和油料来源,本研究旨在建立进境大豆4种检疫性病毒的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)微流控芯片检测方法,为基层口岸对进境粮食携带病毒的快速筛查提供技术支持,实现植物病原物鉴定的现场化、简便化和自动化,加快口岸通关速度.[方法]针对进境大豆中检测需求较高的4种检疫性病毒——菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)、烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)、番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)、南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)的保守基因序列设计LAMP引物组,将引物与微流控芯片结合,进行LAMP微流控芯片扩增试验.以4种阳性病毒质粒为模板对LAMP微流控芯片检测方法的灵敏度进行评估,以已知阳性病毒核酸样品和南芥菜花叶病毒等非目标病毒核酸样品对该检测方法的特异性进行评估.[结果]结果表明,本研究建立的LAMP微流控芯片检测方法的检测灵敏度达到102～103 copies/μL(针对BPMV的检测灵敏度为102 copies/μL,针对TRSV、ToRSV、SBMV的检测灵敏度为103 copies/μL),特异性强,各病毒间无交叉反应;在114个样品检测中,采用LAMP微流控芯片检测方法与标准方法的检测结果一致,阳性符合率均为100.00%;但在检测TRSV、ToRSV时,各存在1例假阳性,阴性符合率为99.06%.[结论]本研究建立的LAMP微流控芯片检测方法灵敏度高、特异性强,对进境大豆中BPMV、TRSV、ToRSV、SBMV 4种病毒的检测阳性符合率与标准方法的检测结果一致,可实现植物病原物检测鉴定的现场化、简易化与自动化,能够有效缩短口岸通关时长、助力重大植物疫情精准管控,具备极高的实际应用价值与开发前景.
进境大豆检疫性病毒菜豆荚斑驳病毒烟草环斑病毒番茄环斑病毒南方菜豆花叶病毒LAMP微流控芯片
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生猪检疫承担疫病阻断、流通核验与安全保障等多重职责,传统监管模式在信息衔接、过程追踪与风险识别层面长期存在结构性短板.信息化监管嵌入之后,检疫对象、业务流程与判定方式开始发生整体变化.统一编码、平台协同与预警研判彼此贯通,推动检疫运行由分段管理转向链条化治理.基层执行、区域联动与案例实践表明,体系构建的关键落点不在单项技术叠加,而在数据规则、业务组织与监管机制的协同整合.由此,生猪检疫逐步形成全过程留痕、动态识别与闭环处置相衔接的运行格局.
生猪检疫信息化监管运行体系风险预警实践路径
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针对可能随进境大豆传入的检疫性有害生物番茄环斑病毒Nepovirus lycopersici(ToRSV),设计一对特异性RT-PCR引物并开展方法学评估.结果表明,该引物可特异性检出不同来源ToRSV阳性样品,与ArMV、TBRV、TRSV、CNSV及其他病毒核酸无交叉反应.经体系优化,该引物最佳反应终浓度为0.32 μmol/L,检测限达5.6 pg/μL,灵敏度较行业标准引物提升100倍.抗干扰试验结果表明,该引物可在混合病毒核酸及不同大豆总RNA背景下稳定检出目标病毒.采用本方法检测72份不同来源大豆样品,检测结果与行业标准完全吻合.综上,本研究建立的RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、抗干扰性好,可为口岸番茄环斑病毒检疫鉴定提供高效、可靠的新型技术手段.
番茄环斑病毒反转录聚合酶链式反应RNA1片段
