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1.课题来源与背景：根据市委组织部《关于开展2022年省级人才项目申报推荐工作的通知》要求，市动物卫生监督所立足当前肉牛产业中牛支原体肺炎多发、常发态势，围绕流行病学调查、临床诊断、病原检测、免疫预防等方面，组织申报了张掖市牛支原体肺炎综合防控技术研究及技能人才培养项目，通过市委组织部推荐，成功入选2022年度陇原青年创新创业人才(团队)项目名单，并下达项目资金20万元。通过该项目的实施，计划达成如下目标任务：一是应用流行病学调查方法，对该市肉牛养殖重点乡镇牛支原体肺炎进行全面普查，查清发病重点区域、危害程度，为精准防控牛支原体肺炎提供科学依据；二是对发病牛进行现场观察和病理剖检，掌握发病规律、发病季节、发病年龄及典型临床症状、病理变化，为该病的临床诊断提供参考；三是应用兽医实验室检测方法(分子生物学方法)，对采集的病样进行病原检测，查清该病病原，为该病的确诊和免疫预防奠定基础；四是在查清疫病发生流行、掌握诊断方法的基础上，通过采取免疫预防、对症治疗、消毒灭源和无害化处理等综合防控措施，有效控制牛支原体肺炎的发生和流行，为张掖市肉牛产业健康可持续发展创造有利条件。在牛支原体肺炎综合防控技术研究推广的同时，带动培养一批基层实用技能人才。 2.技术原理及性能指标：应用流行病学调查方法，对甘州、临泽、高台三县区13个肉牛养殖重点乡镇79个养殖场(小区)的牛支原体肺炎疫病进行调查，查清了发病重点区域、发病规律和危害程度。对病死牛进行现场观察和病理剖检，分离出8株牛支原体病原，选择15种药敏纸片对分离出的病原开展药敏试验，拟定了药物治疗方案，开展了药物治疗试验。引进华中农业大学研制的牛支原体疫苗(中试产品)9000头份，在发病重点乡镇开展疫苗免疫试验，共免疫育肥牛、犊牛和怀孕母牛共880多头，开展免疫试验肉牛养殖场(小区)的发病率和病死率显著下降。根据该病的流行情况，结合项目取得的成功经验和做法，制定了《张掖市牛支原体肺炎综合防控技术规程》，并在肉牛养殖重点乡镇进行示范推广，重点发病乡镇(沙井镇、小满镇)牛支原体肺炎发病率降低8%以上、发病死亡率降低10%以上。围绕项目关键环节，在国家级核心期刊发表论文1篇、省级期刊发表论文2篇、制作科普短视频1个，2项国家发明专利处于发明公布阶段。邀请华中农业大学和兰州兽研所专家教授，累计开展现场指导服务38场次、座谈交流3场次，现场指导农牧民500多人次，培养专业技术人才41名，培养乡村兽医、养殖场技术骨干等农村实用技术人才200多人次。 3.技术创造性和先进性：一是应用流行病学方法，查明该市牛支原体肺炎的重点发病流行区域、危害及流行规律。二是通过临床检查和病理剖检，掌握典型临床症状和病理变化。三是采集病样，采用分子生物学方法查清病原。四是研究筛选适宜本地血清型的特异性疫苗，在生产中开展免疫预防。五是通过实验室药敏试验和临床试验筛选特效药物和合理组合配方在临床上进行治疗。六是将研究成果集成配套，制定“牛支原体肺炎综合防控技术规程”，在生产中进行普及、推广。 4.应用情况：通过应用牛支原体肺炎综合防控技术，重点发病乡镇沙井镇、小满镇牛支原体肺炎的发病率分别从11.2%和10.6%减低至1.62%和2.8%，病死率从17%和39.8%减低至5.1%和4.2%，以以上两个乡镇的饲养基数9782头和10460头计算，养殖损失减少626.92万元；推广到项目实施的3个县区13个乡镇，年肉牛养殖损失减少(暨养殖效益增加)2000多万元。

中国是畜禽养殖大国，福建是养禽大省。随着产业发展、气候变化及RNA病毒的不断变异，使禽流感等动物疫病日趋复杂，严重威胁畜牧业和人类健康。该团队多年来从事流感病毒、白血病病毒两种重要RNA病毒的研究，聚焦在病毒感染与免疫调控的前沿科学问题，探讨持续变异的病毒与宿主之间复杂的互作关系，深入解析蛋白质和非编码RNA在病毒感染致病中的功能，阐释病毒致病与宿主免疫调控的分子机制，为疫病防控和保障公共卫生安全提供科学指导。取得以下重要创新性成果： 1、揭示了Syk、ZC3HAV1等重要宿主蛋白在抗病毒免疫应答中的作用及其机理。发现了宿主Syk激酶通过活化STAT1在抗流感病毒天然免疫应答中发挥关键调控作用，并阐明了作用机制；解析了锌指蛋白ZC3HAV1通过调控I型干扰素介导的抗病毒免疫应答来抑制流感病毒复制的机理；阐明了IFITMs、CH25H、PKR等分子在抵抗流感病毒入侵过程中的功能及作用机制。这些重要成果大大加深了对宿主抗流感病毒免疫应答分子调控网络的认识，成果在Cell子刊Cell Rep、国际免疫学重要期刊Front Immunol等上发表。 2、在国际上首次筛选、鉴定、命名了四种重要lncRNAs，解析了这些lncRNAs在病毒致病致癌和宿主天然免疫中的重要功能及作用机制。鉴定了一种受Abl癌基因调控的重要lncRNA，命名为lncRNA-IUR，阐明了lncRNA-IUR通过调控STAT5-CD71信号通路抑制白血病病毒或癌基因介导细胞癌变的分子机理；鉴定并命名了lncRNA IFITM4P，发现其作为竞争性内源RNA（ceRNA）调控流感病毒诱导的免疫应答；鉴定并命名了lncRNA ISR，发现其反馈性调控IFN-β表达从而抑制病毒复制的重要机制；鉴定并命名了lncRNA RDUR，揭示其影响RIG-I介导的信号通路参与病毒-宿主互作的新机制。成果在国际权威学术期刊Mol Cancer【影响因子（IF）为27.7】、国际病毒学权威期刊J Virol（并被该期刊选为亮点论文，配有专文评述与推荐）、Front Immunol等上发表。 3、阐明了流感等病毒通过自身蛋白或“劫持”宿主蛋白实现其感染致病的新机制。通过体内体外研究揭示了流感病毒通过劫持宿主蛋白SOCS3促进宿主产生“细胞因子风暴”进而导致肺组织损伤的分子机制；阐述了白血病病毒Tax和HBZ蛋白在抑制宿主抗病毒反应和逃避免疫监视中的调节功能；发现了流感病毒NS1蛋白维持自身稳定性、拮抗宿主免疫功能的新机制。成果发表在国际兽医学权威期刊Vet Res、及国内外重要期刊Front Immunol、Acta Pharmacol Sin等上。 上述研究获国家自然科学基金委的重点项目（联合基金）和重大研究计划培育项目等资助。主要成果发表SCI论文10篇，总他引次数711次，其中5篇代表作总他引201次。5篇代表作最新的总IF为51.80。

兽医疫苗管理软件是一款专门设计用于协助兽医、动物医疗机构和养殖场等行业管理疫苗相关信息的应用程序。该软件提供了全面的功能，旨在优化疫苗的使用、库存管理、接种记录和生产质量管理。 兽医疫苗管理软件的主要组成部分和功能如下：疫苗计划和提醒：兽医可以根据不同种类的动物、其年龄、生长阶段等因素制定个性化的疫苗接种计划。这有助于最大程度地提高免疫效果，减少动物患病的风险。 批次跟踪：如果某个批次的疫苗出现质量问题或者需要紧急召回，批次跟踪功能可以快速定位受影响的疫苗批次，帮助兽医或管理员及时采取措施，防止受影响的动物继续接种可能存在问题的疫苗。 疫苗库存管理：通过库存管理功能，兽医可以实时监控各类疫苗的库存水平，确保养殖场或动物群体随时都有足够的疫苗供应。这有助于应对突发疫情或计划内的免疫需求，确保动物群体的免疫保护。 动物档案管理：通过动物档案管理功能，可以详细记录每个动物的基本信息，包括种类、年龄、性别、健康状况等。这些信息有助于兽医全面了解动物群体的构成和健康状况。 总体而言，兽医疫苗管理软件的目的是提高工作效率、提供准确的信息记录、优化资源管理，从而改善兽医服务的质量，保障动物的健康，提高养殖业的生产水平。

“粮猪安天下”，中国猪肉生产和消费总量均列世界第一。生猪产业是繁荣经济、建设现代农业的重要组成部分。生猪疫病日益严重成为掣肘生猪产业健康发展的核心要素。副猪嗜血杆菌病是危害猪场最严重的细菌性疾病之一，主要危害5-8周龄断奶保育仔猪，发病率在30-60%，死亡率高达90%。其病原菌耐药谱广，地域特征明显，血清型复杂，导致原有疫苗所覆盖的血清型有限，交叉保护力低。课题组在省高校产学合作项目、省发改委战略新兴产业项目等支持下，历经14年，系统开展了副猪嗜血杆菌菌株分离鉴定及种毒筛选研究，创制了副猪嗜血杆菌多价疫苗，疫苗与田间流行菌株匹配度高，高效、安全、副反应小。有效解决了现有疫苗免疫交叉保护力弱、疫苗抗原含量低等突出问题。疫苗已在企业转化生产，全国推广应用。 主要创新点如下： 1.构建了全面系统的副猪嗜血杆菌细菌分离鉴定研究体系：率先建立了系统的副猪嗜血杆菌细菌分离鉴定体系，摸清了国内副猪嗜血杆菌病的流行本底，发现其耐药严重，耐药基因存在转移现象，探明了副猪嗜血杆菌的生物学特性及耐药机制。 2.成功创制多价灭活疫苗：选育出与国内副猪嗜血杆菌流行优势血清型匹配度高、安全性好，免疫原性强、性状稳定的血清1、4、5、12、13型疫苗菌株，收藏于中国微生物菌种保藏中心。创制了2种涵盖国内优势致病血清型的多价灭活疫苗，疫苗抗原与田间致病菌匹配度高，针对性强，均有良好交叉保护性，安全有效。其中所创制的4、5、12型三价灭活疫苗获国家三类新兽药证书和国家兽药产品生产批文，明确了副猪嗜血杆菌多价疫苗的免疫机制。 3.创新佐剂应用：首创将银杏叶黄酮苷作为副猪嗜血杆菌灭活疫苗佐剂，相比传统铝胶、矿物油佐剂，以4mg/mL银杏叶黄酮苷制备的佐剂疫苗能显著诱导仔猪机体产生细胞免疫，仔猪血清中的IL-2及IFN-γ等细胞因子水平都显著提高，IgG抗体水平也显著提升。银杏叶黄酮苷作为疫苗佐剂克服了传统油乳剂疫苗抗体易应激、易产生炎症等弊端。 4.优化生产工艺：优化副猪嗜血杆菌多价疫苗生产工艺，创新了一种细菌高效培养及菌苗超滤浓缩技术，突破传统菌苗产业技术瓶颈，副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗检验规程与质量标准列入农业农村部部兽医生物制品质量标准。 项目成果获得国家三类新兽药证书1件，国家兽药产品生产批文2件，列入农业部兽用生物制品质量标准1件，获得国家授权发明专利5件，国际授权专利1件，国家实用新型专利1件，发表论文18篇。项目创制的多价灭活疫苗在黑龙江、湖北、四川和福建等生猪主产区推广应用1060多万头生猪，出栏商品猪成活率平均提高了4.40%，创造经济效益2.92亿元。 项目成果经以中国工程院院士夏咸柱等专家组成的评审委员会评价，一致认为项目成果整体达到同类研究国内领先。其中，将银杏叶黄酮苷作为疫苗佐剂有创新性，达到国际先进水平。疫苗的推广使用，使生猪产业健康持续发展，提高了养殖户和养殖企业的收入水平。

该项目开发了创新的基因工程大肠杆菌高密度发酵培养基及其发酵工艺，填补了国内空白，并成功实现了该技术的产业化应用。该培养基技术相较于单一浓度的传统培养基，采用了1×、2×、3×三种浓度的基础培养基，并结合工艺需求流加碳源补料培养基和氮源补料培养基，显著突破了传统培养基的局限性，攻克了传统培养基产量低、操作复杂、批间差大、适应性差的技术难题。通过该技术的应用，能够在19小时内实现OD600值高达200，收获菌泥湿重达到400g/L的高密度发酵水平，显著超越了行业现有的OD600值50左右、收获菌泥湿重100g/L左右的发酵指标。该项目干粉培养基设计，简化了下游企业的生产流程，缩短了生产周期，相对于传统培养基，显著提升了下游企业生产效率和产品稳定性，为下游企业提高产量75%以上，降低生产成本50%以上。该项目培养基技术具有极好的广谱适用性，能够广泛应用于抗原、抗体、酶制剂、手性氨基酸、人胶原蛋白等多种生物制品的生产，突破了传统培养基仅适用于单一产品的局限性。 该项目获得了发明专利1项(专利号：ZL202111461731.2)，并已成功推广应用于多家生物企业，累计创造经济效益1.4158亿元，节约生产成本1000万元以上。同时，该培养基生产的疫苗表现出低副反应，显著减少了免疫应激导致的动物死亡、饲养成本和疫苗生产成本。该项目为生物制品行业的技术进步和畜牧业健康发展做出了积极贡献，产生了显著的经济和社会效益，具有广阔的应用前景。

(一)课题来源与背景：猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是冠状病毒科冠状病毒属成员，引起的猪传染性胃肠炎是一种以呕吐、严重腹泻和脱水性肠炎为主要特征的高度接触性、致死性传染病，是严重危害国内外养猪业的重要疫病之一。模式识别受体是机体抵御病原微生物入侵的第一道防线，是机体启动天然免疫应答的重要组成元件，在先天性抗病毒免疫中发挥着尤为重要的作用。RIG-I是模式识别受体中极为重要的一类分子，其通过RLR级联信号诱导I型干扰素和炎症因子的产生，在抗病毒天然免疫中起着非常重要的作用，RIG-I已经被报道具有抑制多种RNA病毒复制的作用。据研究报道，冠状病毒具有多种策略拮抗宿主机体的天然免疫反应，抑制RLRs通路的激活，有些病毒能够通过修饰切割dsRNA从而使RLRs与其无法结合，有些是通过自身编码的蛋白对RLRs具有抑制作用，而TGEV作为冠状病毒科的重要成员与RIG-I之间有没有拮抗作用以及具有怎样的拮抗机制？还没有研究报道，所以该研究旨在探究猪传染性胃肠炎病毒拮抗RIG-I抗病毒作用。 基于此，向省科技厅申请实施甘肃省青年科技基金计划项目《猪传染性胃肠炎病毒拮抗RIG-I抗病毒作用》，并于2021年获得立项，项目编号为：21JR7RA719，项目资金4.00万元。 (二)研究目的与意义：天然免疫在机体抵抗外来病原微生物过程中发挥了重要作用，模式识别受体是机体发挥天然免疫的重要组成元件，在机体发挥天然免疫反应方面已发现了多种模式识别受体，如识别内体核酸的TOll样受体、识别病毒RNA的RIG-I样受体以及作为广谱DNA感受器的cGAS。RIG-I是RIRs家族的重要成员，至今已发现RIRs家族有RIG-I、MDA5和LGP2三个成员，RIG-I能够识别病毒双链RNA并通过RLR级联信号诱导I型干扰素和炎症因子的产生，在抗病毒天然免疫中起着非常重要的作用，RIG-I已经被报道在多种RNA病毒复制过程中发挥着重要的作用。该研究通过构建猪源RIG-I的真核表达质粒和针对猪源RIG-I合成干扰RNA，运用qRT-PCR方法和TCID50试验探究在RIG-I不同表达量的情况下对TGEV复制的影响；通过TGEV感染宿主细胞，运用qRT-PCR方法和Westorn-bolt试验探究随着TGEV的增殖对RIG-I蛋白表达的影响。该研究旨在探明TGEV拮抗RIG-I抗病毒作用以及为拮抗机制研究奠定基础。 (三)主要论点与论据： 1、该研究成功构建了猪RIG-I基因的真核表达粒p-RIG-I-His，并发现在PK-15细胞内能够成功表达且主要分布于细胞质中。论据：(1)从PK-15细胞中成功克隆了猪RIG-I基因，并将其插入真核表达粒构建出了猪RIG-I基因的真核表达粒p-RIG-I-His；(2)将真核表达粒p-RIG-I-His转染至PK-15细胞，进行western blotting和间接免疫荧光表达验证实验，结果显示，RIG-I在PK-15细胞内成功表达，大小约为110kDa，主要分布于细胞质中。 2、上调或下调表达RIG-I增加TGEV的复制。论据：(1)将构建的真核表达粒p-RIG-I-His转染至PK-15细胞进行过表达RIG-I对TGEV复制的影响试验，发现过表达RIG-I抑制TGEV的mRNA转录水平和病毒滴度；(2)设计合成了3对RIG-I的siRNA序列：sscRIG-I-234、sscRIG-I-1121、和sscRIG-I-2319，均能高效沉默RIG-I的表达，以其中的沉默效果最好sscRIG-I-1121进行下调表达RIG-I对TGEV复制的影响试验，发现下调表达RIG-I能够增加TGEV的复制。 3、TGEV感染可以上调RIG-I mRNA的转录水平和促进RIG-I蛋白表达，而随着TGEV感染时间的增加，TGEV可以降解RIG-I蛋白。论据：(1)通过qPCR和western blotting试验研究TGEV感染PK-15细胞后对RIG-I表达的影响，发现TGEV感染可以上调RIG-I mRNA的转录水平和促进RIG-I蛋白表达；(2)通过western blotting试验检测不同感染时间TGEV对RIG-I蛋白表达的影响，发现随着TGEV感染时间的增加RIG-I蛋白的表达量逐步降低。 (四)创见与创新： 1、TGEV与RIG-I存在拮抗关系，上调或下调RIG-I可以抑制或促进TGEV复制，TGEV感染可以促进RIG-I蛋白表达。 2、TGEV存在RIG-I蛋白降解机制，可以降解RIG-I蛋白。 (五)社会经济效益，存在的问题： 1.社会经济效益：该项目取得的社会效益：通过该项目的实施提升了青年科研人员的项目组织实施能力和科研创新能力；为TGEV拮抗RIG-I抗病毒作用的分子机制以及为探明在TGEV感染过程中RIG-I介导的抗病毒信号通路研究奠定了基础。该项目进行的是基础理论研究，不直接产生经济效益。 2.存在问题：该项目虽然在TGEV拮抗RIG-I抗病毒作用研究方面取得了不错的科研成果，但还需在“TGEV感染过程中RIG-I介导的抗病毒信号通路”方面进行深入研究，以期解析出TGEV拮抗RIG-I抗病毒作用的分子机制，为新型抗病毒药物开发奠定理论基础。

①课题来源与背景：“黑毛驴品系繁育技术研究与示范”项目(批准文号：市科发〔2018〕60号，项目编号2018-2-3N)由白银市科技局列项，白银市畜牧兽医局承担，各县区畜牧兽医局(中心)协作完成，执行期为3年。驴的驯化可以追溯到7000多年前，发展中国家拥有全球96%的驴和60%的马。在农村和城郊地区，役用动物是主要的收入来源，维持着大家庭的生计。驴是农村发展的重要组成部分，也是牧区、社区的重要交通工具。畜牧业发达的国家都有发达的驴产业，发达国家把驴产业的发展水平作为现代农业特别是畜牧业发展水平的重要标志。中国是传统养驴大国，用于生产肉、皮、奶的养驴业正在成为中国农村的一项重要产业，由役用依次向肉用、药用、乳用、保健及生物制品开发等多用途的“活体经济”转变，驴产业已逐渐发展成新兴特色产业。甘肃省是养驴大省，存栏数量一直居全国各省前列，而白银市政府积极支持驴产业发展，出台了一系列促进驴产业发展的政策，并举办了“第五届(2019)中国驴业发展大会暨第三届国际毛驴产业发展论坛”。 ②技术原理及性能指标：运用家畜繁育技术、动物医学、影像学、计算机信息技术、中医药学、生物化学与分子生物学、生理学、细胞生物学、遗传学等学科的技术原理，建立驴繁育示范基地2处，组建选育群1000头，开展了2个品系4个家系的选育，构建驴群繁育管理数据库1个。集成示范驴舍建造、选种选配、人工授精、妊娠诊断、营养调控等技术，繁育驴812头；公、母驴驹平均初生重分别提高2.61kg和1.82kg。累计示范推广2.2万头，单位规模新增纯收益1446.9元，新增经济效益3183.18万元。 ③技术的创造性与先进性：运用数据化管理方式搭建黑毛驴繁育数据分析管理系统，通过妊娠驴日粮添加中药方式提高驴驹出生体重体尺，提出不同钙磷水平日粮对哺乳驴驹体尺体重的影响，构建初产初生驴驹体尺体重之间相关性的数学模型，提出缩短黑毛驴母驴空怀期的中医药技术。 ④技术的成熟程度，适用范围和安全性：自主研发的黑毛驴繁育管理系统、提高驴驹出生体重体尺、缩短黑毛驴母驴空怀期等技术覆盖项目整个示范区，项目整体技术通过反复试验和再创新并结合文献数据库，使之更加符合当地生产实际，通过示范推广证实了这些技术的成熟性，技术已经处于成熟阶段。该项目技术是在理论上是成熟的，在技术层面上则有很大的可塑性。中国东西南北地域辽阔、自然条件差异很大，从而使得引进技术有了很大的探索空间，因地制宜，从实际出发，可使这些技术日臻完善，趋于成熟。在全国黑毛驴生产的地区均可进行推广应用。提高驴驹出生体重体尺、缩短黑毛驴母驴空怀期等技术经过生物化学和细胞生物学检测，未发现异常情况，表明这些技术是安全的。 ⑤应用情况及存在的问题： 应用情况：项目区全面应用了全价颗粒饲料饲喂驴驹、提高母驴繁殖性能技术、不同钙磷水平影响哺乳驴驹体尺体重、血清生化指标、B超应用于母驴查情与妊娠诊断、中药影响初产初生驴驹体重体尺、血清生化及血细胞、醋酒灸治疗肉驴风寒湿痹、黑毛驴繁育数据分析管理系统、中医药缩短黑毛驴母驴空怀期试验、黑毛驴常见病预防等技术均取得良好的效果。 存在的问题：黑毛驴养殖技术水平较低，规模化养殖发展较缓。繁育方式落后，技术水平提升较难。品系繁育体系未建立长效机制。繁育系统及各类仪器投入较少。

该项目是2020年9月通过国家自然科学基金委项目评审获批的青年科学基金项目。近年来，饲养宠物的热潮在中国方兴未艾，伴侣动物心血管疾病的发病率亦呈逐年上升之趋势。宠物动脉粥样硬化(AS)是多种心血管疾病的病理基础，严重影响宠物生活质量和健康状态，给养宠家庭造成极大的损失。但国内尚无动物专用防治药物，兽医临床亟需宠物专用抗AS药物。AS的主要致病机制为血液中的单核细胞在病理因素作用下进入血管内膜下分化为巨噬细胞，进而摄取大量的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)，导致细胞胆固醇代谢紊乱，最终转化为泡沫细胞(FCs)，最终不断堆积形成AS斑块。因此，调节巨噬细胞胆固醇代谢，降低细胞炎症水平是减少FCs形成，抑制AS的重要环节。 阿司匹林丁香酚酯(AEE)是利用结构拼合的前药原理，将预防心脑血管疾病的药物阿司匹林与活性多样的天然产物丁香酚，通过酯化反应合成的一种新型药用化合物，不仅保留了两种化合物的原药效作用，而且降低了阿司匹林刺激胃肠道的副作用、克服了丁香酚的不稳定性。系列研究表明，AEE具有降血脂、抗炎、抗氧化、抗血小板聚集、预防血栓形成、预防动脉粥样硬化等作用。前期研究发现其能够显著降低高脂血症大鼠的血脂水平和血液炎性细胞因子水平，有效改善金黄地鼠AS主动脉管腔狭窄，减少FCs数量。因此推测其可能通过调节巨噬细胞胆固醇代谢，降低细胞炎症水平，进而减少FCs数量，抑制AS的发生、发展。 为了验证上述推测，该项目分别从体内、体外实验开展了AEE防治小鼠AS作用及机制研究。首先，成功构建了ApoE-/-小鼠AS模型，开展AEE防治AS作用实验。结合小鼠血脂水平检测、主动脉整体油红O染色及病理切片检测，证明AEE(118、168、217mg/kg)具有抑制AS斑块形成的作用，高剂量组的抑制作用最明显。然后，成功建立ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7形成FCs模型，进一步结合细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量检测及Bodipy染色和油红O染色，筛选出AEE抑制巨噬细胞泡沫化的药物浓度分别为80、160、320μM。进而通过Dil-ox-LDL摄取实验、胆固醇外流实验发现AEE具有抑制胆固醇摄取和促进胆固醇外流的作用。在作用机制研究中，分别通过qRT-PCR、WB和免疫荧光染色发现AEE可能通过调控PPARγ抑制胆固醇摄取、增强胆固醇外排。同时，通过PPARγ/NF-κB信号通路发挥降低细胞炎症水平的作用，从而减少巨噬细胞泡沫化，抑制AS的发生发展。项目相关研究内容已经全部完成，发表高水平论文3篇，顺利结题。 虽然AEE抑制FCs形成，抗AS的作用已经被证实。但是，血液中单核细胞透过内皮细胞屏障进入内膜下层分化成巨噬细胞，进而转化为泡沫细胞，AEE在此过程中发挥的调控机制并不明确。因此，后续研究将采用ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人源单核细胞(THP-1)、RAW264.7脂质过氧化损伤模型，通过划痕实验评价AEE对HUVEC迁移能力的影响，通过检测细胞黏附分子表达水及Transwell共培养实验评价AEE影响单核细胞黏附内皮细胞的作用，进一步探究AEE在单核细胞转化为FCs的过程中如何影响细胞互作，是否通过TLR4/NF-κB通路调控巨噬细胞极化，降低炎症水平进而抑制泡沫细胞产生。预期实验结果将为阐明AEE预防AS机制提供理论依据，为将AEE开发为宠物专用抗AS药物奠定理论基础。

一.来源与背景：张掖市羊产业进入了一个生产平稳发展、质量稳步提高、综合生产能力不断增强的新阶段，养羊业已经成为农业农村经济发展的支柱产业和乡村振兴战略的重要支柱。虽然养殖资源丰富、发展势头良好，但在全省调整产业结构，推动建设3个千万只肉羊产业带的大背景下，羊产业发展在良种繁育、品种引进、高效生产等先进技术创新、示范、应用、推广方面仍存在一些问题，部分地区良种繁育体系建设滞后，没有形成区域统一的良种繁育规划，生产培育技术与省内外其他市州仍然存在差距。此外，尽管不少养殖场都在利用引进的优良品种与本地品种杂交，但由于缺乏良种选育标准和产业发展指导规范，使杂交品种的生产性能差异较大。为了进一步促进肉羊产业的高质量发展，该项目立足张掖本地资源优势和产业基础，优选澳洲白、杜泊、南丘、东弗里生等肉羊杂交父本，以品种纯繁、杂交改良、示范推广利用方式，立项开展集成技术的研究，建成以高档肉羊新品种“引进、繁育、示范、推广”为一体的良种肉羊繁育场4个，集中研究解决优质高效羊肉生产途径的难题，形成适合本地肉羊发展的良种繁育体系。以良种肉羊繁育场为重点，规模合作社、规模养殖户为骨干，实行“公司+农户+基地”的模式深化合作，大力推广肉羊经济杂交示范推广，使良种肉羊育繁推规模化产业格局基本形成。 基于以上背景，张掖市畜牧技术推广站，依托甘州区、民乐县、肃南县、山丹县4个肉羊繁育场，筹措128万元资金，在省农业农村厅科技教育处申请立项，项目名称为“良种肉羊高效繁育与生产技术集成示范”(项目编号：GNKJ-2023-4)。 二.技术原理及性能指标：1.肉羊高效繁育技术试验示范。应用同期发情、人工授精、超数排卵、胚胎移植、恒温短时异地输配等高效繁殖技术，开展选种选配，构建适于本地发展的肉羊良种繁育模式，进行示范推广；制定相应的繁育技术规范，为项目区羊产业可持续发展和提升肉羊养殖经济效益提供良种保障和技术支撑，辐射带动周边肉羊规模养殖户应用高效繁育技术开展杂交改良，项目期内应用高繁技术处理肉羊1000只以上。使母羊年繁殖羔羊效率提高50%，羔羊死亡率控制在3%以下，肉羊养殖经济效益提升10%。2.精准生产模式试验示范。通过技术培训与示范引导，大力推广和建立肉羊“461(四高、六早、一全)”高效生产模式。即饲养高繁殖力和高增重量肉羊，采用“湖羊♀×杜泊♂→商品肉羊”杂交模式，调制高营养饲料，利用机械化饲喂技术；羔羊7-8日龄喂开食料(早开食)，50-60日龄断奶(早断奶)，5-6月龄上市；母羊断奶时决定去留(早选育)，7-8月龄配种(早配种)，4-5岁淘汰(早淘汰)；羊群采用TMR技术(饲喂全混合日粮)。3.智能化良舍推广示范。针对部分养殖户沿袭着传统的养殖方式的实际，羊舍建造不合理、不适用、不保温、不避暑等，结合本地气候特点，突出羊舍建造的科学化、简易化和经济实用性，设计推广“一种冬暖夏凉适宜养羊的钢结构羊舍”，并配套自动消毒系统、自动饲喂系统、自动饮水系统、自动清粪系统、环境智能调控系统等设施设备，在规模化养殖场示范推广，为羊只营造良好生活环境，实现更好的经济效益。4.营养调控技术试验示范。根据肉羊不同生理阶段及生产水平，对各类营养的需求量，把玉米、麸皮、豆粕、油渣等精饲料，与苜蓿、燕麦和青贮玉米等粗饲料，科学配制混合后形成各个阶段肉羊不同生理阶段及生产水平的全混合日粮配方，完成羔羊、育肥羊、怀孕母羊、基础母羊４套全混合日粮配方设计。建立优质饲草料供给体系，大力推广应用，不断增强肉羊体质和健康状况，提高肉品质量。 三.技术的创造性及先进性：1.采用同期发情(ES)、人工授精(AI)、胚胎移植(ET)等高效快繁技术，开展选种选配，构建适于本地发展的肉羊良种繁育模式。开展良种登记和生产性能测定、数据智能化采集等工作；通过组建高产核心群，不断提升肉羊繁育速度和质量，扩大良种肉羊群体。2.布局高标准肉羊养殖单元(种公羊舍、繁殖母羊舍、产羔育幼舍、育肥场和病羊隔离观察舍)，以及兽医及人工授精室、TMR中心(饲草料加工区)。设计推广“一种冬暖夏凉适宜养羊的钢结构羊舍”。大力推广和建立肉羊“461(四高、六早、一全)”高效生产模式，缩短肉羊养殖的时间和空间，大幅度提高养殖效益。开展全混日粮设计与试验应用，完成羔羊、育肥羊、怀孕母羊、基础母羊全混合日粮配方设计，实现良好经济效益。 四.应用情况： 1.在甘州区、山丹县、民乐县、肃南县开展肉羊良种繁育，推广应用同期发情、超数排卵、胚胎移植、恒温短时异地输配等技术，2023年引进澳洲白、杜泊、萨福克等肉用化专门品种1600只，新建人工授精站3个，繁育良种羔羊5余万只。培育生产性能稳定、高产的优质肉羊群体，组建了甘肃华瑞、甘肃西黎、甘肃全民牧业肉羊核心群3400只，培育建成了甘肃华瑞、甘肃西黎、屋兰鑫盛园省级种畜禽场3个。 2.开展了全混合日粮设计与试验应用，通过边试验边改进，初步设计了羔羊、育肥羊、怀孕母羊、基础母羊４套全混合日粮配方设计，并在民乐县、肃南县进行了示范推广。 五.完成指标： 1.通过项目实施，培育了生产性能稳定、高产的优质肉羊群体，组建了肉羊核心群3个，共3400只，建成了省级种羊场3个。 2.通过项目实施，开展了全混合日粮设计与试验应用，完成了羔羊、育肥羊、怀孕母羊、基础母羊4套全混合日粮配方设计。 3.通过项目实施，项目区母羊年繁殖羔羊效率提高了50%，羔羊死亡率降低至2.8%，饲养成本降低7.7%，肉羊养殖经济效益提升10.8%。 4.通过项目实施，培训技术人员100人次，发表论文4篇。

①课题来源与背景：课题来源：国家自然基金项目“双峰驼胃ALNA黏膜定植微生物的结构与功能的研究”(31960693)。背景：皱胃淋巴集结区(Aggregatedlymphoidnodulesarea，ALNA)是分布在双峰驼胃的一个发达的、器官化的淋巴集结区。该特殊结构由项目负责人发现，并于2003年在英国兽医杂志首次报道。迄今为止，团队还发现该结构存在于单峰驼和羊驼，而其他动物和人都未见具有该结构的报道。前期工作已经验证，ALNA和肠道淋巴集结一样，属于黏膜免疫的诱导部位。 ②研究目的与意义：探讨胃不同腺体区黏膜免疫与细菌群落之间的相互关系及黏膜免疫不同效应分子之间的相互作用关系及对细菌群落的影响，明确FRCs及其相关结构对维持双峰驼ALNA的微生物稳态的作用机制及其对黏膜免疫功能的调节作用，同时为进一步研究特殊动物肠道菌群及其代谢物与机体免疫稳态的互作机制提供了新的视角。 ③主要论点与论据：1.利用16S核糖体RNA(16S rRNA)基因测序技术研究了成年健康双峰驼前腺囊、后腺囊、第三腺囊、贲门腺、胃底腺及幽门腺细菌群落的分布特征及分布规律。2.利用代谢组学分析技术，完成了双峰驼胃肠系膜淋巴结之间的关键差异代谢产物的筛选及对皱胃LMFR、RMFR和回肠PPs的黏膜定植微生物最标志性的高贡献代谢物的筛选。3.利用转录组学技术分析对双峰驼ALNA和回肠PPs的差异基因进行研究，探究ALNA的FRCs的黏膜免疫特征、以及在消化道黏膜免疫中的相关性，对双峰驼胃肠系膜淋巴结的免疫应答特征进行了进一步研究。4.利用原核表达及免疫荧光等技术，对PDPN、IgA和IgG等在双峰驼胃肠系膜淋巴结之间的变化规律进行了分析。提示FRCs相关的基因在RMFR中显著高表达，这为进一步研究FRCs对双峰驼ALNA黏膜免疫调节和微生物稳态的影响提供了基础。5.利用免疫组化技术研究在胃不同腺体区的IGa⁺和IgG+细胞数量变化规律。为探讨黏膜免疫不同效应分子之间的相互作用关系及对细菌群落的影响提供了有力支撑。6.利用病原菌分离鉴定技术，对双峰驼皱胃ALNA与非ALNA区、回肠PPs区和非PPs区的病原菌进行分离鉴定。为进一步研究乳酸菌在双峰驼消化道黏膜免疫中扮演的角色和发挥作用机制提供前期材料。 ④创见与创新：研究明确了双峰驼、单峰驼和羊驼：1.胃不同腺体区定植菌群的变化规律及胃肠系膜淋巴结之间定植菌群的差异；2.皱胃LMFR、RMFR和回肠PPs之间及胃肠系膜淋巴结之间的关键差异代谢产物；3.双峰驼ALNA网格区、纵行区和回肠PPs区之间菌群的特征；4.分析了FRCs特异性标记物；5.分析了胃不同腺体区及为肠系膜淋巴结之间的IGa⁺和IgG+细胞数量变化规律；6.分析了定植在双峰驼皱胃ALNA与非ALNA区、回肠PPs区和非PPs区同株益生性乳酸菌的生理特性和抑菌性能。为进一步研究特殊动物肠道菌群及其代谢物与机体免疫稳态的互作机制提供了有力支撑。 ⑤社会经济效益，存在的问题： 社会经济效益：经济方面，双峰驼的驼绒品质优良，可用于高端纺织，创造可观经济价值；驼奶营养丰富，市场需求大，带动相关产业发展。社会层面，双峰驼能适应恶劣环境，在沙漠地区承担运输重任，促进偏远地区的交流与发展。此外，对双峰驼的研究有助于保护生物多样性，推动生态旅游发展，为当地居民提供就业机会，提升生活水平，对区域经济和社会稳定起到积极作用。 存在的问题：无。 ⑥历年获奖情况：无。