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1.课题来源与背景：该成果的课题来源为广东省科技计划项目"M基因缺失型狂犬病病毒载体在新型动物疫苗研制及病毒中和抗体检测中的应用研究"(项目编号：2014A020214006)。在中国预防和控制狂犬病的关键是建立完善的动物狂犬病预防体系，通过疫苗接种包括宠物犬、流浪犬在内的各种犬类及野生动物，从源头上控制狂犬病。预防体系的建立依赖于疫苗免疫的规划、实施和效果评价，而对动物抗体水平的监测是评价疫苗免疫效果的重要依据。传统的狂犬病灭活疫苗安全、有效，但成本昂贵。弱毒疫苗成本低廉，但存在毒力残留或致病性回复突变的安全隐患。因此，中国依然亟需研制一种经济、安全、有效的狂犬病疫苗。世界上预防狂犬病最广泛使用的是灭活的狂犬病疫苗。这类疫苗尽管有效，但需要接种多针才能诱导足够的免疫保护，一般保护期为半年到1年，而且价格昂贵。减毒活疫苗仅需极少量病毒就能有效诱导保护性免疫应答，这类疫苗的生产成本通常比灭活疫苗显著降低，而且可能通过非注射的方式进行接种，如口服接种等。但是，现有的减毒活疫苗(主要限用于野生动物)都不同程度地存在安全性方面的问题。狂犬病病毒反向遗传操作系统近年来已成功应用在新一代狂犬病疫苗的多项研究中。利用该技术开发出更安全、更有效、更廉价的狂犬病减毒活疫苗及新型的病毒中和抗体监测手段，对于全世界特别是发展中国家的狂犬病预防非常必要。 世界卫生组织(WHO)和世界动物卫生组织(OIE)认可的狂犬病病毒中和抗体检测方法主要是快速荧光灶抑制实验(RFFIT)和荧光抗体病毒中和试验(FAVN)。这两种方法在检测结果的一致性和稳定性方面都比较好。但这两种方法依然存在一些缺陷，它们都要以狂犬病病毒标准固定毒株CVS-11为实验毒株进行血清抗体的中和试验，该毒株为致病株，存在安全风险。同时两种方法的操作复杂，对实验室条件和操作人员的要求较高，且需要价格昂贵的荧光素标记的抗体作为实验材料。因此，它们不适用于一般实验室或基层用于狂犬病病毒中和抗体水平的监测，现今仍亟需研发建立一种安全、经济且快速的狂犬病病毒中和抗体检测方法。已有一些研究利用表达绿色荧光蛋白的重组狂犬病病毒建立病毒中和抗体的检测方法，但这些方法都存在一个问题是，所用重组毒株都来源于弱毒毒株，这些毒株在病毒表面的糖蛋白序列上具有一定的差异，糖蛋白是狂犬病病毒重要的抗原性蛋白，因此使用弱毒株所测得的中和抗体水平是否能真实地反映中和野毒株或强毒株的抗体水平？这个问题尚需进一步探讨。另一方面，虽然这些方法使用的是弱毒株，但依然存在潜在的病毒扩散风险。 2.技术原理：该成果在基因缺失型病毒的基础上，整合入绿色荧光蛋白EGFP基因，在表达强毒的G基因的BHK细胞上拯救出表达EGFP的重组狂犬病病毒，利用此重组病毒建立起了一种准确、快速、安全的狂犬病病毒中和抗体检测方法。在疫苗研究方面，同时开展2条技术路线的研究。路线一是将华南地区犬细小病毒流行毒株的主要抗原基因VP2插入狂犬病病毒基因组，研究该重组病毒的生物学特性、安全性及免疫原性，为研制出经济、安全、有效的狂犬病和犬细小病毒病的基因工程二联疫苗株奠定基础。路线二是将具有良好免疫佐剂活性的IL-6基因插入含双G基因的狂犬病病毒基因组中，构建出一种能够快速、低剂量诱导机体产生保护的基因工程疫苗。该研究在保证安全性的同时，拓宽了狂犬病病毒载体的运用范围，也为研制具有自主知识产权的犬类传染病防控产品打下坚实的基础。 3.技术的创造性与先进性： (1)利用G基因缺陷型重组毒株建立了一种安全、经济的狂犬病病毒中和抗体检测方法，该方法能够解决标准或已有方法中存在的几个不足：一是该重组毒株能表达绿色荧光蛋白，做完中和试验后即可直接在荧光显微镜下观察，无需固定细胞及利用荧光素标记的抗体进行检测，既经济也能节省时间；二是该重组毒株可以在表达狂犬病病毒CVS-11毒株糖蛋白的BHK-21细胞中繁殖，并在出芽释放时获得细胞表达的CVS-11毒株糖蛋白，CVS-11为RFFIT和FAVN两种标准方法所用的固定毒株。因此，利用该重组毒株建立的狂犬病病毒中和抗体检测方法在准确性上优于利用弱毒株建立的检测方法；三是该重组毒株的基因组中缺失糖蛋白基因，因此无法在普通细胞和动物体中复制和扩散，是一种复制缺陷型毒株，具有很高的安全性。 (2)构建和拯救了一种携带2个G基因和广州地区犬细小病毒流行毒株VP2基因的重组狂犬病病毒。该重组病毒相较于亲本株具有较高的培养滴度，可以降低犬用疫苗的生产成本，又能够在小鼠体内诱导产生较高的抗狂犬病病毒抗体与抗犬细小病毒抗体水平，可以作为狂犬病和犬细小病的二联疫苗候选株。 (3)携带和表达犬源IL-6基因的重组狂犬病病毒rHEP-CaIL6能够迅速激活小鼠中枢神经系统的干扰素通路及相关细胞因子，强烈诱导机体的体液免疫和细胞免疫反应，产生较高的狂犬病病毒中和抗体水平，免疫较低的剂量即可起到90%以上的攻毒保护率。研究结果表明，IL-6可以起到良好的免疫佐剂效果，rHEP-CaIL6有望成为一种具有较大潜力的犬用基因工程疫苗。

技术领域：该发明涉及饲料技术领域。更具体地说，该发明涉及一种富含混合发酵型桑枝叶微贮饲料的生态狗粮及饲喂方法。 背景技术：随着中国经济的快速发展，人们的精神需求越来越高，饲养宠物的群体越来越多。养宠物狗多少使用商品狗粮，以肉类为主，富含高蛋白。长期使用这样的商品狗粮，会产生以下几个问题： (1)长期食用高蛋白的饲料，对狗的肝脏、心脏和血液等生产巨大的压力，引发脂肪肝、高血压、高血脂等疾病，严重影响狗的健康； (2)狗也存在很多疫病，长期的亚健康状态，会降低狗的免疫力，使狗容易生病，增加饲养宠物狗的成本和难度； (3)狗的口腔与身上会有严重的异味，特别是在室内饲养的情况下，掉毛的情况也很严重，饲喂高蛋白狗粮，狗的粪便也很臭，这些情况严重影响饲养宠物的体验。 桑枝叶是一种新型非常规饲料，资源丰富，产量巨大，并且桑枝叶中富含蛋白质、动物必须氨基酸、必须脂肪酸、黄铜、多糖、生物碱、矿物质和维生素等高营养物质，可以提高动物的生长性能、免疫能力和抗氧化能力，在生猪、鸡、鸭、羊、牛、兔等动物养殖中使用，因桑枝叶不利于动物消化故而在动物养殖使用范围和使用量上受到一定限制。在狗粮中，极少使用桑枝叶，因此，研发一种以桑枝叶微贮饲料为主的生态狗粮具有广阔的市场前景，既能充分利用桑枝叶的营养保健功能，又能降低狗粮生产成本。

随着宠物饲养的不断流行，宠物相关及周边产业近年来规模迅速扩大。此款专利定位于宠物零食，为宠物食品相关行业。此款专利通过添加茶叶有效抑制犬只口腔的致臭菌群及口腔异味，营养丰富兼具良好的适口性。 产品工艺：粉碎，滚轧，烘烤创新方法：添加红茶及绿茶茶叶以改善犬只口腔健康添加塔拉胶提升产品适口性主要指标：茶叶添加量为2%左右产品粗蛋白含量为22%左右，高筋面粉与分离蛋白比为3：1麦芽糖浆添加量45% A：茶叶提取物市售宠物饼干B：2%绿茶半干湿饼干C：2%红茶半干湿饼干能D：无除臭效果饼干相比无添加及市场同类产品，该专利产品显著改善犬类的口腔卫生状况效益分析随着近年来中国家庭宠物饲养规模不断扩大，宠物及周边行业具有高速增长高附加值的特点。宠物零食作为宠物食品相关行业具有很高市场潜能。家庭饲养犬只对于口腔异味以及牙齿健康的改善有极高需求。此款专利产品不仅营养丰富均衡，适口性极高，而且通过动物实验验证对于犬只口腔致臭气体抑制具有显著效果。此方法使用的工艺简单成熟，配方优良。 应用情况：此专利犬零食已在江苏中恒宠物用品有限公司生产。授权专利：一种具有清除口臭的宠物犬软曲奇饼干及其制作方法201210143404.7。

①课题来源与背景：国家国际科技合作专项：重要动物病原快速检测技术的引进和创新利用(项目编号：2014DFA31730)；广东省工业高新技术领域科技计划项目：猪蓝耳病和猪瘟的疫苗株与野毒株的鉴别诊断(项目编号：2013B010102012)；广东省技术交易体系与科技服务网络建设领域科技计划项目：猪伪狂犬病病毒分子鉴别诊断试剂盒的研制及推广应用(项目编号：2016A040403084)。 ②技术原理及性能指标：HRMA技术是利用与饱和荧光染料结合的双链在温度升高的过程中会发生减色效应的物理性质，通过检测双链在熔解过程中释放的饱和染料荧光信号所形成的特征熔解曲线，进行产物中核苷酸差异的鉴别；FMCA技术是基于标记探针与模板结合发出荧光信号随着温度升高出现减色效应，检测探针与模板结合双链在熔解过程中释放的探针荧光信号所形成的特征熔解曲线检测SNP差异；研制了国际首个具有鉴别功能的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗，为控制和净化猪蓝耳病提供了可实现疫苗株与野毒株鉴别诊断的产品保障。 ③技术的创造性与先进性：搭建精准分子鉴别检测技术研发平台，创制了猪蓝耳病病毒和伪狂犬病病毒基因分型及疫苗株与野毒株精准分子鉴别检测体系，为解决疫苗排毒干扰检测结果、开展精准分型诊断提供技术支撑；基于悬浮培养技术研制了国际首个具有鉴别功能的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗，为控制和净化猪蓝耳病提供了可实现疫苗株与野毒株鉴别诊断的产品保障；系统研究了猪蓝耳病、猪伪狂犬病免疫不同代表性疫苗株对近年来流行毒株的保护效力，为优选疫苗、优化免疫程序及净化控制方案提供重要参考；融合精准分子诊断、疫苗免疫及有效抗体评测体系，制定、优化了猪伪狂犬净化和猪蓝耳病控制技术方案，为猪伪狂犬和猪蓝耳病的控制和净化提供技术支撑和体系保障。 ④技术的成熟程度，适用范围和安全性：基于HRMA和FMCA研发新型诊断方法处于临床推广应用阶段，高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株，悬浮培养)已获国家三类新兽药证书，并在全国范围内推广应用。 ⑤应用情况及存在的问题：华威特(江苏)生物制药有限公司核心技术产品"高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株，悬浮培养)"2019年至2021年在全国累计推广2467.37万头份，新增销售额166.55万元，新增利润6203.93万元。勃林格殷格翰动物保健(上海)有限公司在2019年至2021年间，共生产"猪繁殖与呼吸综合征活疫苗"1.65亿头份，在全国348个项目养殖场应用，根据效益核算每年可新增经济效益9亿元。佛山市瑞宝动物保健有限公司是IDEXX产品华南区总代，累计推广IDEXX PRV/ADV gB抗体检测试剂盒900个、IDEXX PRV/ADV gI抗体检测试剂盒3000个、IDEXX PRRS X3抗体检测试剂盒2000个，及其它相关检测产品，直接销售额达4500万元，利润达900万元。 ⑥历年获奖情况：中国畜牧兽医学会颁发的2015年度和2017年度中国"猪蓝耳病"研究进步奖。 ⑦成果简介：创制了猪蓝耳病病毒和伪狂犬病病毒基因分型及疫苗株与野毒株精准分子鉴别检测体系，为解决疫苗排毒干扰检测结果、开展精准诊断提供技术支撑；基于悬浮培养技术研制了首个具有鉴别功能的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗，为控制和净化猪蓝耳病提供了可实现疫苗株与野毒株鉴别诊断的产品保障；系统研究了猪蓝耳病、猪伪狂犬病免疫不同疫苗株对流行毒株的保护效力，在此基础上，融合精准分子诊断、疫苗免疫，制定、优化了猪伪狂犬净化和猪蓝耳病控制技术方案，为猪伪狂犬和猪蓝耳病的控制和净化提供技术支撑和体系保障；成果获得新兽药证书1件，生产批文1个，高新技术产品证书1个，获授权国家发明专利4件，其中转让1件，发表研究论文7篇(SCI4篇)；累计培训各类技术人员11.5万人次；推广示范企业新增销售额35.5亿元，新增利润24亿元，产生的经济社会效益显著；成果总体达到国内领先水平，其中猪蓝耳、猪伪狂犬分型检测体系和猪蓝耳鉴别疫苗(TJM-F92株，悬浮培养)均达到国际先进水平。

该项目来源于钦科发(2020)148号文件下达的钦州市科学研究与技术开发计划项目《家犬狂犬病防控技术的开发与推广研究》，由钦州市钦北区动物疫病预防控制中心、广西大学、广西璞缔恩葳生物技术有限公司承担，钦州市科学技术局管理该项目。 一、总体目标： 对钦北区家犬的狂犬病免疫现状进行调查了解，解决普遍存在的免疫难的问题；对家犬的狂犬病免疫效果进行评估，制定合理的免疫程序，提升免疫密度和免疫水平；创建新媒体形式进行科普宣传，将先进有效的防控理念和方法推广到基层，持续进行狂犬病的灭源工作，推动公共卫生事业健康发展，保护人民群众生命安全。 二、项目主要内容： ①通过对钦北区各镇家犬的存栏情况和免疫情况进行调研，掌握家犬的狂犬病免疫现状，建立示范点集中进行免疫；通过推广应用“狗保定钳”解决保定难的问题；通过采用“无痛免疫方法”进行集中免疫，不断提高免疫密度。 ②钦北区动物疫病预防控制中心负责组织采集400份犬血清，由广西大学负责组织人员采用ELISA方法对血清抗体进行监测和数据分析，对钦北区家犬狂犬病免疫效果进行评估。 ③钦北区动物疫病预防控制中心负责组织采集400份外观健康犬的唾液或脑组织，由广西大学采用分子生物方法对这些外观健康犬样本进行狂犬病病毒带毒情况检测。 ④利用新媒体形式进行狂犬病防控知识的广泛宣传，如免疫技术、采样技术、犬伤紧急处理等的科普宣传培训，强化家犬主人对犬只管理的主体责任，增强人民群众的公共安全防控意识。 三、主要技术与经济指标完成情况： ①开发诊断试剂盒1种。 ②在国内公开发表论文3篇以及研究报告1篇。 ③指导1名学生完成毕业课题，培养10名技术骨干。 ④申请实用技术专利1项； ⑤利用自媒体和传统培训方式结合方式进行狂犬病防控知识的宣传，培训2万人次。 四、项目实施的绩效： 1.获得3项实用新型专利授权，发表论文7篇，科研报告1篇。 2.组织人员普查家犬存栏数量并调查狂犬病的疫情发生情况，在钦北区十二个镇(街道)设立“无痛免疫方法”点进行集中免疫，全面推进“把疫苗打给犬”，提高了家犬的免疫密度和免疫抗体水平，分别采集了400份犬血清和犬脑送检，钦北区人间狂犬病例从2014年的11例降低至2022年的1例，防控效果显著。 3.通过项目实施，指导6名研究生毕业完成毕业课题，积极引导兽医工作者参加课题研究、技术推广、技术培训以及撰写论文等工作，共培养了10名技术骨干，其中有8名人员获得副高级职称提升，有2名人员取得硕士学位，从专业知识、实操技术等方面提高了自身的综合能力。 4.积极宣传狂犬病防控技术知识，通过播放人畜共患病科普宣传片、开展线上培训和现场培训活动，共举办了32期培训，累计培训宣传惠及2.4万余人；同时走进社区、小学和街道发放科普宣传册3万余份，张贴了宣传挂图200幅、标语1300条。各项培训宣传活动极大提升了畜牧兽医从业人员对狂犬病的防控技术水平，针对性提高了养犬户和公众防控意识。 五、存在的问题和解决措施： (一)存在问题： 建立狂犬病病毒核酸实时荧光定量RT-PCR方法进行狂犬病病毒的核酸诊断，在应用方面取得了很好的效果，但是随着检测标本量的增加，也发现了荧光定量PCR法本身的一些缺点，同时存在其他推广问题。 1.检测不够快速：从核酸提取、试剂配制到PCR检测过程需要大量精细操作，完成一轮检测至少需要2小时，不利于迅速得到检测结果。 2.检测结果干扰因素多：如样本种类、样本采集方法、样本储存运送、干扰物质、核酸提取试剂和荧光定量PCR仪稳定性都会直接影响实验结果；低浓度样本的检测准确度和灵敏度不够。 3.广大群众对狂犬病防控工作的重要性和必要性认识不足，在广大农村地区对犬只仍然采用的是传统的放养模式。人被犬咬伤后也不知道如何采取正确的防护措施。狂犬病免疫工作经费短缺，实施免疫的仪器设备老化破旧，在开展免疫工作时兽医技术人员的安全得不到有效的保障。 (二)下一步工作措施： 1.在现有诊断方法的基础上，积极推广实时荧光定量RT-PCR方法进行狂犬病病毒核酸的检测。通过开展理论和实操培训，提升检测人员的实验规范操作、仪器使用、数据结果分析和判断等综合能力水平。 2.通过采取网络平台和现场培训等灵活多变的形式积极广泛地宣传狂犬病的综合防控知识，做到家喻户晓、童叟皆知，提升民众的认识水平，让群众自觉的做到文明养犬，对家犬实行栓养或圈养，强化犬主人对犬只管理的主体责任。

1、课题来源：浙江省“三农六方”科技协作项目(编号：CTZB-F160728AWZ-SNY1-17)(浙江省猪伪狂犬病毒流行变异和净化技术研究)。 2、背景：猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒(PRV)引起的猪急性传染病，该病在猪群中呈爆发性流行，可引起妊娠母猪流产，死胎、种猪不育，新生和断奶仔猪的死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。该疫病具有病死率高、传播快、流行范围广、传播途径多、病原体顽固等特点，中国自1948年首次报道该病以来，已有多个地区报道伪狂犬病的流行，给中国的养猪业带来了巨大的经济损失。随着中国规模化养猪趋势的快速发展及伪狂犬病疫苗的推广使用，基本控制了伪狂犬病的爆发和流行，且有一定数量的猪场已经实现了伪狂犬病的净化。但近年来，中国猪伪狂犬病在规模化猪场的流行有上升趋势，疫病的防控形势依然不容乐观。本中心对近年来对浙江省内各地市的规模猪场监测发现，浙江省内猪伪狂犬病毒的感染率较高，提示该省猪伪狂犬病流行和爆发风险较大。主动监测和早期诊断隔离预防，是预防和控制猪伪狂犬病的重要环节之一。因此，在浙江省乃至全国范围内开展猪伪狂犬病病原体和抗体监测及流行病学调查对猪伪狂犬病的动物防控具有重大的意义。针对PRV疫苗株和流行株鉴别检测方法尚末建立，无法对PRV流行株和疫苗株的混合感染进行有效鉴别诊断，极大延误了猪伪狂犬病防控措施的实施，导致猪伪狂犬病疫情的扩散和流行。因此建立鉴别PRV疫苗株和流行株的核酸检测方法已迫在眉睫，对猪伪狂犬病的预防和控制具有十分重要的意义。此外PRV变异也是导致猪伪狂犬病流行的重要因素之一，更为严重的是PRV变异往往导致现行疫苗保护效果下降甚至失效。 养殖场动物疫病的净化符合现阶段动物疫病防控规律、适应当前畜牧业发展方式转变的需要。《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》提出了优先防治禽流感等16种国内动物疫病，特别指出要大力开展种畜禽场疫病净化工作，实施种畜禽场疫病净化计划，逐步实现种畜禽场8种主要疫病的净化。其中猪伪狂犬病也是畜禽场净化的疫病之一，加强猪伪狂犬病净化技术的研究符合当前畜牧业发展的需要，对全面提升规模化养殖场猪伪狂犬病防控水平，保障畜牧业生产安全、动物产品安全和环境安全具有重要的意义。 3、目的和意义：该项目通过浙江省PRV流行变异和净化技术研究项目的实施，将建立有效可靠的猪PRV疫苗株和流行株的荧光定量PCR鉴别诊断方法，旨在解决当前诊断方法无法同时鉴别疫苗株和流行株的缺点。而且通过项目的实施，也将开展浙江省范围内PRV的流行变异及新分离毒株的生物学特性的研究，及时地了解掌握PRV流行变异规律，为浙江省PRV预防控制提供理论依据。同时该课题组也将对现行PRV疫苗和免疫策略免疫保护效果进行研究，筛选出适用于浙江省猪伪狂犬病防控的疫苗及其相应的免疫策略，为浙江省内PRV疫苗的合理选择和科学使用提供指导意见，制定规模猪场生物安全措施指导意见，探索和集成1项PRV的净化技术方案；并将其应用规模猪场伪狂犬病的净化，提升规模猪场的经济效益。 4、主要成果： A、建立了猪伪狂犬病病毒野毒株与疫苗株荧光定量PCR检测方法，并在临床得到应用。 B、分离到猪伪狂犬病毒变异株11株，并对其变异状况进行了详细地分析。初步建立了该省的猪伪狂犬病毒的样品库。 C、集成猪伪狂犬病净化技术一项，并在实际生产中应用。

1、总体目标：在贵港亚计山区域种猪成功实现猪瘟、猪伪狂犬病和高致病性蓝耳病的净化，并成功建立示范区，集成一套净化示范区科学技术方案。 2、主要研究开发内容：该项目通过应用综合集成的免疫防控、鉴别诊断和病原学检测、阳性动物筛查和淘汰、生物安全防控等技术，实现猪瘟和猪伪狂犬病在亚计山区域种猪场内实现净化；通过种猪群非免疫、病原和血清学检测、阳性动物筛查和淘汰，加强生物安全防控等技术，实现高致病性蓝耳病在亚计山区域种猪场内实现净化，最终实现在贵港亚计山区域成功建立猪瘟、猪伪狂犬病和高致病性蓝耳病净化示范区。 3、项目创新点和取得的突破：项目实施过程中创制的猪瘟和伪狂犬病疫苗净化评估方法，技术规范和标准，制定的净化方案，以及高致病性蓝耳病非免疫无疫评估方法和技术规范，实现高致病性蓝耳病阴性场的维持所制定的生物安全措施方案，将为中国开展猪瘟、猪伪狂犬病和高致病性蓝耳病在中国的根除净化和生物安全预警提供科学依据。项目针对中国流行及防控中急需的关键技术，开展猪瘟、猪伪狂犬病和高致病性蓝耳病的净化技术集成和示范，通过项目实施，可以在中国实现区域内规模化猪场中猪瘟、猪伪狂犬病和高致病性蓝耳病的净化，提高区域内猪群的健康度，有效的提高中国养殖生产效率，降低成本，对保障中国养殖业安全，促进养殖业可持续发展以及提升中国养殖业的国际竞争力产生深远的影响。 4、项目应用成效：项目实施过程中，在面临非洲猪瘟严厉攻势下，项目单位从整体防非措施和净化示范区内生猪安全考虑，建立了全方位人、猪、物、料、车等关键点多级洗消措施，总结出扬翔铁桶防非方案，在广西扬翔股份有限公司所有猪场推广使用，并得到自治区政府和兽医主管部门肯定，在广西自治区超过一千多个规模化猪场推广使用。

一、方案：成立狂犬病防控工作机构指挥部成立领导小组，由县人民政府分管领导任组长，农业农村、公安、卫生健康、财政等各职能部门负责人为成员，统一指挥包括犬防疫在内的全县重大动物疫病防控工作。 二、技术路线：本底调查风险因子评估制定防控技术规程评估体系(净化标准、评价指标)优化犬场布局升级生物安全设施设备强化各项管理疫苗选用和免疫控制采集样品，对狂犬病抗体和病毒监测野毒抗体或病毒核酸阳性或二次免抗体不合格的淘汰无害化处理、检疫、监督免疫效果评价免疫屏障化效果维持。 三、疫苗接种技术方案： (一)优化免疫程序。各地农村犬的免疫程序普遍采用一年两次的春秋季集中免疫方案，该方案具有良好的免疫效果，缺点是工作量大，费用高，且与口蹄疫、禽流感春秋两季集中强制免疫工作高度重合，较难兼顾。为探索可靠、成本低、便于大规模接种的免疫方法，经开展犬的狂犬病田间免疫程序试验，推荐免疫方案。 (二)疫苗选择。使用具有农业农村部批文的狂犬病灭活疫苗(Flury株、PV/BHK-21株、CTN-1株等)均可，疫苗不低于WHO生物制品标准专家委员会修订的《兽用狂犬病疫苗的质量标准》要求的狂犬病灭活疫苗单次剂量的效力不应低于1.0 IU/mL含量、免疫持续期至少应1年标准。使用田间试验，对本地抗体检测后，选出对应特异免疫效果相对更好的PV/BHK-21株疫苗。 (三)免疫程序。1、规模场：养殖密度高的养殖场犬，由犬主实施两次免疫，首免后14d进行二次免疫，每次肌肉注射1头份/只。2、农户：散养的广大农村犬，在秋季集中强制免疫后(每年11月份左右)利用一个月时间集中免疫狂犬病一次，每次肌肉注射1头份/只，并在免疫后28天内(抗体快速上升期)由农户对犬只进行圈/栓养干预，避免犬只狂奔撕咬、湿冷干热应激、正常喂食和保障健康，通过改善犬饲养条件提高狂犬病抗体水平，之后解除犬干预按原状态自由饲养。 四、免疫接种实施： (一)构建三级防控网络。依托兽医队伍，县农业农村部门设立兽医股和县动物疫病预防控制中心、县农业综合行政执法大队，17个乡镇人民政府设立重大动物疫病防治领导小组和镇农业农村中心，构建起县、乡镇、村级动物狂犬病防控三级网络，共同负责全县3675个自然村屯农村犬的狂犬病防治工作。 (二)设立动物狂犬病免疫接种点。依托乡镇兽医站和村级防疫点设立86个接种点，负责少量狂犬病疫苗的贮藏和发放，对补栏、满龄犬实施日常免疫，降低免疫空白期犬数量，提高日常免疫覆盖率，维持犬狂犬病常年应免免疫密度在90%以上。 (三)接种社会化服务。2021年，藤县创新重大动物疫病和狂犬病防治机制，采用第三方兽医社会化服务机构+政府财政购买服务+设立狂犬病免疫示范点的方式，建立新型长效的动物狂犬病防控机制。通过政府购买服务形式，全县重新聘请村级防疫员103人，为防疫队员购买人身意外伤害保险。每个乡镇选配1名防疫队长，带领队伍逐村逐屯开展犬防工作。政府通过购买服务的方式，免费对群众饲养的犬进行狂犬病疫苗注射，对免疫注射补助人工费10元/只。 (四)整县集中免疫。每年11月左右，集中时间、集中人员逐村逐屯逐镇开展犬只疫苗注射。4人一组，分别负责钳狗、疫苗注射、防疫登记、看风警备。每组配备狗钳1副(大、小各1把)，每人配备雨靴、工作服、加厚长手套等个人防护用品，重点防范同群犬或者周边的犬只对工作人员进行攻击，保障犬免参与人员的人身安全。各乡镇水产畜牧兽医站每10天以报表形式上报免疫进度。 (五)犬防工作验收。免疫结束后，县农业农村局组织人员分成若干组对各乡镇免疫密度进行抽查。每个乡镇随机抽查2个行政村，每个行政村随机抽查5户，询问养殖户家犬的免疫注射情况，并对照免疫登记表记录情况，核查两方面是否一致，按照抽查的免疫密度发放该乡镇的免疫注射人工补助费。视情况，犬免疫14天以后采集血清进行免疫效果监测，对免疫抗体不合格的犬进行加强免疫。 (六)应急处置。藤县动物疫病预防控制中心每年采集犬脑组织送自治区进行狂犬病病毒监测，同时密切关注各乡镇犬有无临床疑似病例，一旦发现病毒核酸阳性样本或疑似疫情报告，立即启动狂犬病流行病学调查，按照农业部《狂犬病防治技术规范》进行追溯、紧急免疫、消毒、扑杀、无害化处理等处置。 五、工作保障： (一)技术保障。在县动物疫病预防控制中心建造疫苗冷库3个，每个乡镇兽医站配备冰箱或冷柜，每个村级防疫员配备冷藏包，保障兽用狂犬病疫苗质量。 (二)县财政设立狂犬病防治专项经费。每年县级财政每年投入狂犬病防治专项经费约70万元，用于犬防人员的人工补助、防护用品、保定工具和消毒剂采购、防治宣传等。 (三)加强犬防工作人员特异性防护。参加犬免疫的人员提前15天到辖区乡镇卫生院进行3针人用狂犬病疫苗注射，待产生抗体后开展犬的免疫注射。在防疫过程中，若发生被犬咬伤或者抓伤意外，立即用肥皂水对伤口进行冲洗，并到卫生部门进行处理，加强狂犬病疫苗注射，必要时注射人用免疫球蛋白。

幼年犬免疫能力低下，肠道菌群不稳定，极易感染各种病毒、细菌、寄生虫等，发生腹泻、呕吐、厌食、抽搐、发烧甚至死亡等情况，加之大部分宠物主人会对犬只进行去势手术处理，4～6月是犬只进行去势手术的最佳时间。所以幼年犬有提升免疫力，改善肠道菌群、加强外伤修复能力的迫切需求。幼犬从9周左右开始进行犬瘟热病毒、犬细小病毒等核心疫苗注射免疫程序，但是一般同种疫苗要注射3针甚至5针，血液内抗原抗体水平才足够高，达到有效预防疾病的效果，所以即使注射了疫苗也不能保证幼犬不患相应疾病。所以如何能增强疫苗免疫效果为自己的爱犬获得最好的防护也是宠物主人急切希望解决的问题。针对幼犬特殊生理状况，市场上迫切需要可以提高免疫力、增强疫苗免疫效果、调节肠道菌群、促进外伤修复的功能犬粮。 黄芪是常用中草药，也是一种常用的重要中药及食疗药膳品，同时《宠物饲料管理办法》(2018年)已将其列入饲料原料目录，其味甘，性微温，具有益气补虚之功效。黄芪多糖是黄芪发挥作用的主要成分。大量研究表面黄芪多糖具有增强免疫系统功能、调节肠道菌群、托疮生肌、抗炎症、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、延缓衰老和降血糖等作用。在中兽药中被广泛应用，尤其是经济动物的和犬只疾病治疗以及配合西药治病方面疗效显著，市场认可度、接受度极高。 针对幼犬特定生理时期，在基础口粮的基础上，添加黄芪多糖和调味剂研制幼犬特医食品。主要完成了幼犬疫苗免疫效果检测，粪便、肠道菌群改变检测，促外伤修复影响测试和其他相关生物学特性研究。发表了SCI论文2篇。与具有类似功能的进口幼犬粮进行适口性对比。在实验基础上优化了功能性犬粮黄芪多糖含量，开发出了一种绿色健康具备提高免疫力、改善肠道菌群、增强外伤修复力的黄芪多糖幼犬功能性犬粮产品，同时为利用其它中药开发功能性犬粮奠定基础。

狂犬病、犬瘟热、犬细小病毒感染、猫瘟等疫病是危害犬猫健康的重大疫病，其中狂犬病是人兽共患病，对人的致死率高达100%。但过去十年里，我国自主研发的犬猫用药、犬猫疫病检测试剂盒起步晚、注册少、投入生产的更少。所以研制犬猫专用的国产疫苗、兽药及检测技术（试剂盒）等来替代国外产品，是我国犬猫产业亟需解决的科学问题。 （1）利用中国本土的人源狂犬病病毒毒株，不断优化工艺及佐剂，成功研制了狂犬病灭活疫苗（CTN-1株）。该毒株与国内狂犬病病毒流行毒株高度同源，疫苗针对性强，质量稳定高效，获得国家三类新兽药注册，成为我国防控狂犬病的重要利器。 （2）在国内率先创制了狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒，获得二类新兽药注册，打破了进口产品的垄断局面，为狂犬病的免疫效果评估提供了重要的科技支撑。 （3）运用PCR技术、PCR-HRM技术等分子生物学技术，研制了犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒四重PCR检测技术，犬细小病毒疫苗株和野毒株鉴别检测技术等，解决了犬猫病毒病鉴别诊断难、检测技术集成度低的难题，在犬猫疫病检测第三方实验室应用推广，为犬猫疫病的治疗和防控提供科学依据。 （4）率先开展犬猫专用抗寄生虫药、抗细菌药的剂型、剂量、生产工艺研究，研制出吡喹酮片、阿苯达唑片、注射用头孢噻呋钠等治疗性药品，打破了严重依赖使用人药、进口犬猫药治疗犬猫疾病的窘境。